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贝博® BBcellProbe® 细胞质染色试剂Calcein-AM是绿色荧光标记的细胞质探针，具有490 / 515nm的最大激发/发射波长。 Calcein-AM是一种可对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，Calcein-AM由于在Calcein的基础上加强了疏水性，因此能够轻易穿透活细胞膜。当其进入到细胞质后，酯酶会将其水解为Calcein留在细胞内，发出强绿色荧光。与其它同类试剂（如BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate）相比，Calcein-AM是最适合作为荧光探针去染活细胞的，因为它的细胞毒性很低，而且不会抑制任何的细胞功能，如增殖和淋巴球的趋化性。 Calcein的激发和发射波长分别为490 nm和515 nm。Calcein -AM仅对活细胞染色。 Calcein, AM和PI经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.染色液Calcein AM注意防潮；避免反复冻融。
3.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。融解后离心至管底部再打开螺旋盖。
4.注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。
5.试剂拆封后请尽快使用完！
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
2.染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
5.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。
6.以下方法仅供参考，根据需要使用，或者参考文献的使用方法。
7.染色后立即进行分析。
8.本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。
9.由于Calcein-AM的工作液稳定性比较差，染色工作液必须现配现用，并且在当天用完。
10.Calcein-AM对湿度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量，分装密封保存。不可使用含水的吸头。
11.试剂A母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
12.参考：可以使用以下方法来优化得到荧光染料的最佳工作浓度。1) 用0.1%皂素或者0.1-0.5%地高辛孵育细胞10min，或者用70%乙醇孵育细胞30min，从而制备死细胞；2) 用15000倍-1500倍稀释（试剂盒中的母液）的PI溶液进行死细胞染色，以得到仅仅对细胞核染色，而不会对细胞质染色的最佳工作浓度。3) 用1000倍-100倍稀释（试剂盒中的母液）的Calcein-AM进行死细胞染色，以得到不会对细胞质染色的最佳工作浓度。然后用此浓度进行活细胞染色，去观察是否活细胞能被染色。
根据样品数按下列比例配制染色工作液。
用HBSS缓冲液或无血清培养基将染色液1000倍稀释，充分混匀，即成染色工作液A。
2. 收集样本细胞。
3. 用PBS洗涤细胞两次。
4. 用200ul染色工作液将细胞重悬。
5. 在室温或37℃避光孵育15-20分钟。
6. 用PBS洗涤细胞。
7. 用适量PBS重悬细胞。
8. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。最大激发为490nm，最大发射波长为515nm和617nm。
结果分析 ：
荧光显微镜下，使用488nm波长激发，活细胞为黄绿色。
Noninvasive temperature monitoring for dual-modal tumor therapy based on lanthanide-doped up-conversion nanocomposites
Biomaterials 2019 （IF=8.806）
2.MengWangXin LiuPingping et al.
Transformation of lignosulfonate into graphene-like 2D nanosheets: Self-assembly mechanism and their potential in biomedical and electrical applications
International Journal of Biological Macromolecules 2019 （IF=3.909）
3.Dandan Tan, Jinkun Wen, Lixia Li et al.
Inhibition of RhoA-Subfamily GTPases Suppresses Schwann Cell Proliferation Through Regulating AKT Pathway Rather Than ROCK Pathway
Frontiers in Cellular Neuroscience 2018 （IF=4.3）
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