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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® Blue CMAC细胞质染色试剂盒是利用BBcellProbe® C系列探针进行细胞质染色的试剂盒。本试剂盒中的BBcellProbe® Blue CMAC细胞质染色探针为蓝色荧光标记的细胞质探针，具有353 / 466 nm的最大激发/发射波长。
贝博® BBcellProbe® C系列探针是对活细胞的细胞质进行选择性染色的一类荧光染料，该系列探针可以选择性标记细胞质，BBcellProbe® C系列探针可自由穿过细胞膜，适用于观察细胞质内部生物合成及相关发病机理。
BBcellProbe® Blue CMAC细胞质蓝色荧光探针有极强的疏水性，能够轻易穿透活细胞膜，进入细胞后，被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性荧光分子，从而被滞留在细胞内，使胞质发出强蓝色荧光。荧光物质最大激发波长353 nm，最大发射波长466 nm。可以使用流式细胞仪或激光共聚焦显微镜检测细胞。
BBcellProbe® C系列细胞质探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的蓝色荧光探针，贝博还可以提供红色、蓝色、橙色等颜色的染色试剂盒。
保存温度
-20℃ 避光保存。
注意事项
1.染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1.激光共聚焦
2.荧光显微镜
3.流式细胞仪
4.荧光酶标仪
2.荧光显微镜
3.流式细胞仪
4.荧光酶标仪
适用样本
1. 悬浮细胞
2. 贴壁细胞
2. 贴壁细胞
产品应用
1.激光共聚焦
2.荧光显微镜
2.荧光显微镜
仪器准备
1.激光共聚焦/荧光显微镜
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液 或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1. Blue CMAC染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
2. 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
3. BBcellProbe® Blue CMAC探针母液容易受潮变质，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。4.吸取BBcellProbe® Blue CMAC探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
5. 未使用完的BBcellProbe® Blue CMAC探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
6. BBcellProbe® Blue CMAC探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
8. 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
9.贴壁细胞可以制备成细胞悬液染色，也可以原位染色，请根据实际样本需要染色。
10. 染色后立即进行分析。
11. Pluronic F-127可用于增加染料的水溶性。在染色缓冲液中，添加终浓度0.02%的Pluronic F-127可以稍微提高染色效率。注意避免染料长期储存在含有Pluronic F-127存在的液体中，否则会导致染料失效
2. 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
3. BBcellProbe® Blue CMAC探针母液容易受潮变质，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。4.吸取BBcellProbe® Blue CMAC探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
5. 未使用完的BBcellProbe® Blue CMAC探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
6. BBcellProbe® Blue CMAC探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
8. 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
9.贴壁细胞可以制备成细胞悬液染色，也可以原位染色，请根据实际样本需要染色。
10. 染色后立即进行分析。
11. Pluronic F-127可用于增加染料的水溶性。在染色缓冲液中，添加终浓度0.02%的Pluronic F-127可以稍微提高染色效率。注意避免染料长期储存在含有Pluronic F-127存在的液体中，否则会导致染料失效
使用方法
1. 染色工作液配制：
根据样本数量，用染料稀释液将BBcellProbe® Blue CMAC荧光染料10倍稀释，再用相应的培养基或者HBSS缓冲液50-100倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1 贴壁细胞
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
3) 37 ℃孵育细胞 30～120分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 吸干染色工作液，用HBSS或其他缓冲液洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，然后吸干培养基。
2.2 悬浮细胞
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×106/mL。
3) 在37 ℃孵育细胞 30～120分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 孵育结束，500×g离心5分钟。
5) 移除上清液，再次缓慢加入37℃预热的HBSS重悬细胞。
6) 重复（4），（5）步骤两次。
3. 结果检测：在荧光显微镜（含合适滤片）下观察细胞。激发/发射波长为353 / 441-466 nm。
根据样本数量，用染料稀释液将BBcellProbe® Blue CMAC荧光染料10倍稀释，再用相应的培养基或者HBSS缓冲液50-100倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1 贴壁细胞
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
3) 37 ℃孵育细胞 30～120分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 吸干染色工作液，用HBSS或其他缓冲液洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，然后吸干培养基。
2.2 悬浮细胞
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×106/mL。
3) 在37 ℃孵育细胞 30～120分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 孵育结束，500×g离心5分钟。
5) 移除上清液，再次缓慢加入37℃预热的HBSS重悬细胞。
6) 重复（4），（5）步骤两次。
3. 结果检测：在荧光显微镜（含合适滤片）下观察细胞。激发/发射波长为353 / 441-466 nm。
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