贝博® BBcellProbe® C02细胞质染色试剂盒是利用BBcellProbe® C系列探针进行细胞质染色的试剂盒。本试剂盒中的BBcellProbe® C02细胞质染色探针为绿色荧光标记的细胞质探针,具有490 / 515nm的最大激发/发射波长。 贝博® BBcellProbe® C系列探针是对活细胞的细胞质进行选择性染色的一类荧光染料,该系列探针可以选择性标记细胞质,BBcellProbe® C系列探针可自由穿过细胞膜,适用于观察细胞质内部生物合成及相关发病机理。 BBcellProbe® C02细胞质绿色荧光探针有极强的疏水性,能够轻易穿透活细胞膜,进入细胞后,被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性荧光分子,从而被滞留在细胞内,使胞质发出强绿色荧光。荧光物质最大激发波长490 nm,最大发射波长515 nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右,发射波长为 510~530 nm。可以使用流式细胞仪或激光共聚焦显微镜检测细胞。 BBcellProbe® C系列细胞质探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针,贝博还可以提供红色、蓝色、橙色等颜色的染色试剂盒。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完!
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
2.使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
3.BBcellProbe® C02探针母液容易受潮变质,受潮后稳定性较差,注意干燥保存。
4.吸取BBcellProbe® C02探针母液时要用干燥的新吸头,不能使用含水的吸头。
5.未使用完的BBcellProbe® C02探针母液请拧紧螺旋盖,避免受潮失效。
6.BBcellProbe® C02探针工作液含水,配制后不可以长期保存,须现配现用。
7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
8.标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化,确定最佳条件。以下方法仅供参考。
9.染色后立即进行分析。
根据样本数量,用染料稀释液将BBcellProbe® C02荧光染料10倍稀释,再用相应的培养基或者HBSS缓冲液50-100倍稀释,配制成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1 贴壁细胞
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
3) 37 ℃孵育细胞 30~120分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 吸干染色工作液,用培养液洗培养板或盖玻片2~3次,每次用预热的培养基覆盖所有细胞,然后吸干培养基。
2.2 悬浮细胞
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 加入适量体积的染色工作液重悬细胞,使其密度大约为1×106/mL。
3) 在37 ℃孵育细胞 30~120分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 孵育结束,500×g离心5分钟。
5) 移除上清液,再次缓慢加入37℃预热的培养基重悬细胞。
6) 重复(4),(5)步骤两次。
3. 结果检测:
在荧光显微镜(含合适滤片)下观察细胞。最大激发/发射波长为490 / 515 nm。
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