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贝博® BBcellProbe® C21细胞质染色试剂盒是利用BBcellProbe® C系列探针进行细胞质染色的试剂盒。本试剂盒中的BBcellProbe® C21细胞质染色探针为绿色荧光标记的细胞质探针，具有490 / 515nm的最大激发/发射波长。 BBcellProbe® C系列探针是对活细胞的细胞质进行选择性染色的一类荧光染料，该系列探针可以选择性标记细胞质，只需要纳摩尔级（nM）浓度即可有效标记活细胞。 BBcellProbe® C系列探针可自由穿过细胞膜，适用于观察细胞质内部生物合成及相关发病机理。 BBcellProbe® C系列细胞质探针具有多种颜色可以选择，可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针，贝博还可以提供红色、蓝色、橙色等颜色的染色试剂盒。 BBcellProbe® C21细胞质绿色荧光探针有极强的疏水性，能够轻易穿透活细胞膜，进入细胞后，被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子，从而被滞留在细胞内，使胞质发出强绿色荧光。绿色荧光产物的最大激发波长490nm，最大发射波长520nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为 510～530nm。可以使用流式细胞仪或激光共聚焦显微镜检测细胞。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
2.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
3.BBcellProbe® C21探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。
4.吸取BBcellProbe® C21探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
5.未使用完的BBcellProbe® C21探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
6.BBcellProbe® C21探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
7.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
8.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
9.贴壁细胞可以制备成细胞悬液染色，也可以原位染色，请根据试剂样本需要染色。
10.染色后立即进行分析。
1. 染色工作液配制：
根据样本数量，用染料稀释液将BBcellProbe® C21荧光染料10倍稀释，再用相应的无血清培养基或者HBSS缓冲液50-100倍稀释，配制成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育20分钟～2小时（具体孵育时间需根据细胞类型而定）。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液并在荧光显微镜（含合适滤片）下观察。
2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育20分钟～2小时（具体时间需根据细胞类型而定）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察。
3. 观察结果：
在荧光显微镜（含合适滤片）下观察细胞。最大激发/发射波长为490/515nm。
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