贝博® BBcellProbe® Rhodamine 123染色液可用于细胞凋亡检测,Rhodamine 123是一种细胞通透性的、阳离子的荧光探针,容易被有活性的线粒体摄取,没有细胞毒性,Rhodamine 123由于带阳离子所以当线粒体膜电位存在的时候就会透过细胞膜在活细胞的线粒体内聚集,发出黄绿色荧光,而当膜电位下降的时候,聚集的Rhodamine 123就减少,从而发光强度降低。 Rhodamine 123常与Cy5和AMCA (Aminomethylcoumarin Acetate)等组合进行多色荧光分析, 相互间无颜色交叉; 分析细胞凋亡时, 可用Rhodamine 123来检测线粒体的膜电位, 而用NAO来检测线粒体结构的完整性。 Rhodamine 123可用于对许多种细胞进行染色,包括植物细胞和细菌。由于细胞内ATP的量与Rhodamine 123的荧光强度之间有相关性,Rhodamine 123也可应用于检测细胞内的ATP。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
2.染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完!
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.始终保持平衡染液中pH值的一致性,因为pH值的变化将影响膜电位。
4.与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白,他们将与部分染料结合,降低染料的浓度,引起假去极化。
5.本染色液可用于培养细胞、细胞涂片。
6.根据样本情况和下游的检测仪器选择合适的染色方法,只要在染色时染色工作液能充分覆盖细胞样本即可。
根据样本数量,用37℃培养箱预热的培养基或HBSS缓冲液将Rho123染料100-1000倍稀释,配制成染色工作液。
2. 细胞染色
收集培养细胞,用PBS洗涤2次,将细胞沉淀重悬于200ul-500ul的染色工作液中。
3. 37℃培养箱孵育30分钟。
4. 去染液后用培养基洗涤细胞两次。
5. 用培养基重悬细胞。
6. 流式细胞仪或荧光显微镜检测。
流式细胞仪检测:激发波长505nm,发射波长530nm;
荧光显微镜观察:滴加100 ul细胞悬液于载玻片上观察。
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