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产品概述
product description
贝博® BBoneBot® 中性红法细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒是利用细胞对中性红的摄入能力来检测细胞增殖或细胞毒性。中性红可以被活细胞所摄入，并在溶酶体中积累。在细胞增殖加快时，细胞数量增多，可以摄入的中性红的量就会增加。在细胞受到损伤时，中性红的摄入能力会下降。这样通过对于中性红摄入量的不同就可以确定细胞的增殖或毒性情况。 贝博® BBcellProbe® 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品，以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.低温保存后染色液可能出现结晶沉淀。
2.出现结晶可以37℃水浴溶解。
2.出现结晶可以37℃水浴溶解。
有效期
一年
检测方法
酶标仪
适用样本
动物细胞
产品应用
酶标仪
仪器准备
1.带有450nm滤光片的酶标仪 2. CO2培养箱
试剂准备
1.PBS 2.纯水
耗材准备
1.移液器及吸头 2.96孔培养板
使用注意事项
1.中性红染色液存放后会产生沉淀。出现结晶可以37℃水浴后摇匀溶解。染液是过量的，也可以直接吸取染色液的上清液使用，也可以使用针头滤器等过滤去除沉淀后继续使用，不会影响使用效果。
2.96孔板在细胞培养过程中会存在蒸发问题。在加入中性红染色液前，如果培养液存在明显的蒸发问题，会影响细胞的生长状态，并严重影响后续的检测结果。
3.部分药物可能对检测有影响，有影响时需换液后检测，无影响时直接检测。用培养基或PBS来配制待检测药物，加入中性红试剂，测药物溶液在540处的吸光度。如果该吸光度与不含药物仅加中性红试剂的培养基或PBS吸光度差异不大，则可以直接加入中性红，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的200ul培养基和20ul 中性红进行检测。
4.如果样品为高浑浊度的细胞悬液，或者为了去除其它颜色物质的影响，建议设定690 nm作为参比波长，以OD540扣除参比波长的O.D值即可。
2.96孔板在细胞培养过程中会存在蒸发问题。在加入中性红染色液前，如果培养液存在明显的蒸发问题，会影响细胞的生长状态，并严重影响后续的检测结果。
3.部分药物可能对检测有影响，有影响时需换液后检测，无影响时直接检测。用培养基或PBS来配制待检测药物，加入中性红试剂，测药物溶液在540处的吸光度。如果该吸光度与不含药物仅加中性红试剂的培养基或PBS吸光度差异不大，则可以直接加入中性红，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的200ul培养基和20ul 中性红进行检测。
4.如果样品为高浑浊度的细胞悬液，或者为了去除其它颜色物质的影响，建议设定690 nm作为参比波长，以OD540扣除参比波长的O.D值即可。
使用方法
活性测定使用方法：
1. 收集细胞，加细胞悬液200ul（约10000个细胞）到96孔板（边缘孔用无菌水或PBS填充）。每板设对照（加200l培养基）。
2. 置37℃，5% CO2孵育过夜，倒置显微镜下观察。
3. 每孔加入10 ul 待检测药物溶液， 37℃孵育。
4. 至待检测时间点，每孔加入20 ul 中性红溶液，37℃孵育1-4 小时。
5. 移除含有中性红染色液的细胞培养基，用PBS、DPBS或HBSS等适当溶液洗涤1-2次。
6. 加入200微升中性红检测裂解液，室温摇床上裂解20分钟。在摇床上摇动可以促进样品的裂解。
7. 测定540 nm各孔的吸光值。
8. 同时设置空白孔（培养基和中性红溶液，无细胞），对照孔（不加药培养基和中性红溶液，有细胞），每组设定3-5复孔。
结果分析 ：
细胞活力计算：
将各测试孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值。各重复孔的OD值取平均数。
细胞活力% =（加药细胞OD-空白OD/对照细胞OD-空白OD）×100
1. 收集细胞，加细胞悬液200ul（约10000个细胞）到96孔板（边缘孔用无菌水或PBS填充）。每板设对照（加200l培养基）。
2. 置37℃，5% CO2孵育过夜，倒置显微镜下观察。
3. 每孔加入10 ul 待检测药物溶液， 37℃孵育。
4. 至待检测时间点，每孔加入20 ul 中性红溶液，37℃孵育1-4 小时。
5. 移除含有中性红染色液的细胞培养基，用PBS、DPBS或HBSS等适当溶液洗涤1-2次。
6. 加入200微升中性红检测裂解液，室温摇床上裂解20分钟。在摇床上摇动可以促进样品的裂解。
7. 测定540 nm各孔的吸光值。
8. 同时设置空白孔（培养基和中性红溶液，无细胞），对照孔（不加药培养基和中性红溶液，有细胞），每组设定3-5复孔。
结果分析 ：
细胞活力计算：
将各测试孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值。各重复孔的OD值取平均数。
细胞活力% =（加药细胞OD-空白OD/对照细胞OD-空白OD）×100
常见问题分析
1.检测时需要换液吗？
如果待测药物有还原性，需要换液，否则不需要。
2.如何判断待测药物是否含有还原性？
测定不含细胞，仅含有待测药物的溶液加入中性红反应后的在540 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，说明待测药物没有还原性或还原性很小，对中性红没有影响，则可以不换液，在培养基中直接加入中性红 ；如果吸光度相对较大，说明药物具有较强的还原性，则需要除去含药物的培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的200 μl培养基和20 μl 中性红进行检测。
如果待测药物有还原性，需要换液，否则不需要。
2.如何判断待测药物是否含有还原性？
测定不含细胞，仅含有待测药物的溶液加入中性红反应后的在540 nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，说明待测药物没有还原性或还原性很小，对中性红没有影响，则可以不换液，在培养基中直接加入中性红 ；如果吸光度相对较大，说明药物具有较强的还原性，则需要除去含药物的培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的200 μl培养基和20 μl 中性红进行检测。
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