Rhodamine 123染色试剂盒

BB-4137
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产品概述 product description

贝博® BBcellProbe® Rhodamine 123染色液可用于细胞凋亡检测，Rhodamine 123是一种细胞通透性的、阳离子的荧光探针，容易被有活性的线粒体摄取，没有细胞毒性，Rhodamine 123由于带阳离子所以当线粒体膜电位存在的时候就会透过细胞膜在活细胞的线粒体内聚集，发出黄绿色荧光，而当膜电位下降的时候，聚集的Rhodamine 123就减少，从而发光强度降低。 Rhodamine 123常与Cy5和AMCA (Aminomethylcoumarin Acetate)等组合进行多色荧光分析, 相互间无颜色交叉; 分析细胞凋亡时, 可用Rhodamine 123来检测线粒体的膜电位, 而用NAO来检测线粒体结构的完整性。 Rhodamine 123可用于对许多种细胞进行染色，包括植物细胞和细菌。由于细胞内ATP的量与Rhodamine 123的荧光强度之间有相关性，Rhodamine 123也可应用于检测细胞内的ATP。

保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜

适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜

试剂准备
1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.染色后立即进行分析。
4.染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
使用方法

1． 染色工作液的配制：
根据样本数量，用37℃培养箱预热染料稀释液试剂B将Rho123染料10倍稀释。再用相应的培养基或其他缓冲液将Rho123染料进行50-100倍稀释，配制成染色工作液。
2． 细胞染色
收集培养细胞，用PBS洗涤2次，将细胞沉淀重悬于200ul-500ul的染色工作液中。
3． 37℃培养箱孵育30分钟。
4． 去染液后用培养基洗涤细胞两次。
5． 用培养基重悬细胞。
6． 流式细胞仪或荧光显微镜检测。
流式细胞仪检测：激发波长505nm，发射波长530nm；
荧光显微镜观察：滴加100 ul细胞悬液于载玻片上观察。

参考文献
1.Chuan-Ping Feng et al.
Evaluation of the effects of the water-soluble total flavonoids from Isodon lophanthoides var.gerardianus (Benth.) H. Hara on apoptosis in HepG2 cell: Investigation of the most relevant mechanisms
Journal of Ethnopharmacology 2016

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