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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® AO/EB双染细胞凋亡检测试剂盒是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态，是细胞凋亡形态学研究常用的染色方法。 吖啶橙（Acridine Orange，AO）为一种具有细胞膜通透性的荧光染料，该染料能透过活细胞膜，使核DNA和RNA染色。它与细胞中DNA和RNA结合量存在差别，复合物可发出不同颜色的荧光，AO与dsDNA结合时发出绿色荧光，而与ssDNA和RNA结合时发出红色荧光。当与DNA结合时，它与荧光素在光谱上非常相似，激发最大值为502nm，发射最大值为525nm（绿色）。当它与RNA结合时，激发最大值移至460nm（蓝色），发射最大值移至650nm（红色）。 在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染，因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.染色液避免反复冻融。多次冻融会导致失效。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
2.染色液避免反复冻融。多次冻融会导致失效。
3.染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
4.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
2.贴壁细胞
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
试剂准备
1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片等。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，其他方法请参阅相关资料。
4.AO将DNA染成绿色，RNA染成红色，红色荧光在激发光下不久就会消失，等AO的红色荧光消失之后再拍照，否则会干扰EB的红色坏死细胞。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片等。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，其他方法请参阅相关资料。
4.AO将DNA染成绿色，RNA染成红色，红色荧光在激发光下不久就会消失，等AO的红色荧光消失之后再拍照，否则会干扰EB的红色坏死细胞。
使用方法
1. 染色缓冲液的配制：根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100 μL试剂C加900 μl无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。
2. 收集样本细胞，细胞数量在10X105个以内。
3. 用PBS洗涤细胞两次。
4. 用500 μl染色缓冲液将细胞重悬。
5. 加入5μl AO染色液A。
6. 加入5 μl EB染色液B。
7. 轻轻混匀后4℃避光孵育10-20分钟。
8. 用PBS洗涤细胞。
9. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。AO-DNA复合物的最大激发波长为488nm，最大发射波长为515nm，EB-DNA复合物的最大激发和最大发射波长分别为518nm和605nm。
结果分析 ：
正常活细胞的核染色质着绿色，形态结构正常；早期凋亡细胞的膜结构完整，核染色质着绿色，但核已开始固缩或呈串珠状；晚期凋亡细胞，核染色质发橙红色荧光，呈固缩状或串珠状，有时核碎裂散布于胞浆中；有时还可见到细胞核结构正常，但细胞着红色，为非凋亡的死亡细胞。
参考文献
1.Meng Xu, et al.
Hollow mesoporous ruthenium nanoparticles conjugated bispecific antibody for targeted anti-colorectal cancer response of combination therapy
Nanoscale 2019 （IF=7.233）
2.Songhang Li, et al.
MicroRNA‐214‐3p modified tetrahedral framework nucleic acids target survivin to induce tumour cell apoptosis
Cell Proliferation 2019 （IF=5.753）
3. Liang Chen, et al.
Facile synthesis of novel albumin-functionalized flower-like MoS2 nanoparticles for in vitro chemo-photothermal synergistic therapy
RSC Advances 2016 （IF=3.289）
4. Wei Feng, et al.
Flower-like PEGylated MoS2 nanoflakes for near-infrared photothermal cancer therapy
Sci Rep. 2015 （IF=5.228）
Hollow mesoporous ruthenium nanoparticles conjugated bispecific antibody for targeted anti-colorectal cancer response of combination therapy
Nanoscale 2019 （IF=7.233）
2.Songhang Li, et al.
MicroRNA‐214‐3p modified tetrahedral framework nucleic acids target survivin to induce tumour cell apoptosis
Cell Proliferation 2019 （IF=5.753）
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Facile synthesis of novel albumin-functionalized flower-like MoS2 nanoparticles for in vitro chemo-photothermal synergistic therapy
RSC Advances 2016 （IF=3.289）
4. Wei Feng, et al.
Flower-like PEGylated MoS2 nanoflakes for near-infrared photothermal cancer therapy
Sci Rep. 2015 （IF=5.228）
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