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产品概述
product description
贝博® BBcellProbe® Hoechst33342/PI双染细胞凋亡检测试剂盒是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态。 Hoechst33342染色液A可以透过正常细胞膜，而细胞凋亡后，细胞膜对Hoechst33342染色液A的通透性增加，因此进入凋亡细胞中的Hoechst 33342比正常细胞的多，荧光强度要比正常细胞中要高，此外，凋亡细胞的染色体DNA的结构发生了改变从而使该染料能更有效地与DNA结合，并且凋亡细胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到损伤不能有效地将Hoechst 33342排出到细胞外使之在细胞内积累增加等都使凋亡细胞的蓝色荧光增强。 PI染色液B不能透过细胞膜，对正常细胞和凋亡细胞不能染色，而对坏死细胞可以染色。 用两种染色液对细胞进行双染后，使用流式细胞仪或荧光显微镜即可对细胞状态进行检测。在双变量流式细胞仪的散点图上，这三群细胞表现分别为：正常细胞为低蓝色/低红色（A+/B+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（A++/B+），坏死细胞为低蓝色/高红色（A+/B++）。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.开盖前请离心。
2.开盖后组份按要求条件保存。
3.拆封后请尽快使用完！
2.开盖后组份按要求条件保存。
3.拆封后请尽快使用完！
有效期
1年
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
2.贴壁细胞
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
试剂准备
1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
4.染色浓度和时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
5.染色后立即进行分析。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
4.染色浓度和时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
5.染色后立即进行分析。
使用方法
1. 染色缓冲液工作液的配制：
根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100 μL试剂C加900 μL无菌纯水稀释，混匀即成1*染色缓冲液工作液。
2. 收集样本细胞，细胞数量在1X106个以内。
3. 用PBS洗涤细胞两次。
4. 用500 μL-1 ml 染色缓冲液将细胞重悬。
5. 加入5-10 μl Hoechst33342染色液A。
6. 轻轻混匀后4℃避光孵育10分钟。
7. 加入5-10 μl PI染色液B。
8. 轻轻混匀后4℃避光孵育5-10分钟。
9. 用PBS洗涤细胞。
10. 用PBS重悬细胞。
11. 用流式细胞仪或荧光显微镜检测结果。HO33342用紫外光激发，PI用蓝光激发。Hoechst33342-DNA复合物的最大激发波长为350nm，最大发射波长为460nm，PI-DNA复合物的最大激发和最大发射波长分别为488nm和615nm。
结果分析 ：
正常细胞为低蓝色/低红色（A+/B+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（A++/B+），坏死细胞为低蓝色/高红色（A+/B++）。
形态学：正常细胞核形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；凋亡细胞的核呈亮蓝色，或核呈分叶状，碎片状。坏死细胞核红色。
根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。 取100 μL试剂C加900 μL无菌纯水稀释，混匀即成1*染色缓冲液工作液。
2. 收集样本细胞，细胞数量在1X106个以内。
3. 用PBS洗涤细胞两次。
4. 用500 μL-1 ml 染色缓冲液将细胞重悬。
5. 加入5-10 μl Hoechst33342染色液A。
6. 轻轻混匀后4℃避光孵育10分钟。
7. 加入5-10 μl PI染色液B。
8. 轻轻混匀后4℃避光孵育5-10分钟。
9. 用PBS洗涤细胞。
10. 用PBS重悬细胞。
11. 用流式细胞仪或荧光显微镜检测结果。HO33342用紫外光激发，PI用蓝光激发。Hoechst33342-DNA复合物的最大激发波长为350nm，最大发射波长为460nm，PI-DNA复合物的最大激发和最大发射波长分别为488nm和615nm。
结果分析 ：
正常细胞为低蓝色/低红色（A+/B+），凋亡细胞为高蓝色/低红色（A++/B+），坏死细胞为低蓝色/高红色（A+/B++）。
形态学：正常细胞核形态呈圆形，淡蓝色，内有较深的蓝色颗粒；凋亡细胞的核呈亮蓝色，或核呈分叶状，碎片状。坏死细胞核红色。
参考文献
1.Kongxi Zhu, et al.
Long non-coding RNA MBNL1-AS1 regulates proliferation, migration, and invasion of cancer stem cells in colon cancer by interacting with MYL9 via sponging microRNA-412-3p
Clinics and Research in Hepatology and Gastroenterology 2019
2.Oxygen and Indocyanine Green loaded microparticles for dual-mode imaging and sonodynamic treatment of cancer cells
Ultrasonics Sonochemistry 2017
3.Shan Liao et al.
The receptor for activated protein kinase C promotes cell growth, invasion and migration in cervical cancer
International Journal of Oncology 2017
Long non-coding RNA MBNL1-AS1 regulates proliferation, migration, and invasion of cancer stem cells in colon cancer by interacting with MYL9 via sponging microRNA-412-3p
Clinics and Research in Hepatology and Gastroenterology 2019
2.Oxygen and Indocyanine Green loaded microparticles for dual-mode imaging and sonodynamic treatment of cancer cells
Ultrasonics Sonochemistry 2017
3.Shan Liao et al.
The receptor for activated protein kinase C promotes cell growth, invasion and migration in cervical cancer
International Journal of Oncology 2017
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