-20℃避光

1.染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完！

6个月

1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜

1.悬浮细胞
2.贴壁细胞

1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜

1.PBS 缓冲液（pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X））
2.或者HBSS（Hank's Balanced Salt Solution）

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1.M16染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
2.使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
3.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
4.标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
5.染色后立即进行分析。

1、 染色工作液配制：
根据样本数量，用染料稀释液将BBcellProbe® M16荧光染料10倍稀释，再用相应的培养基或者HBSS缓冲液200-2000倍稀释（对于后续需要做固定或透化的样本，100-500倍稀释），配制成染色工作液。

2、 细胞染色
2.1 对于贴壁细胞
1）培养皿/培养板准备细胞样本。
2）待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育15分钟～45分钟（具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）利用新鲜培养基替换上述染色液。
4）荧光显微镜（含合适滤片）或流式细胞仪、荧光酶标仪下观察。最大激发/发射波长为579 / 599nm。或者进行后续的固定和透化步骤。

2.2 对于悬浮细胞
1）离心，吸除上清。
2）利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育15分钟～45分钟（具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化）。
3）离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4）置于荧光镜下观察。或流式细胞仪、荧光酶标仪检测。最大激发/发射波长为579 / 599nm。或者进行后续的固定和透化步骤。

3．固定和透化：
1）染色结束后，利用培养液或缓冲液清洗细胞；
2）小心吸走清洗液。换用新鲜配制且预热的含2-4%甲醛的缓冲液或培养液进行细胞固定。
3）清洗细胞：吸除固定液，用适当缓冲液冲洗细胞数次。
4）细胞透化（可选）：
ICC等实验需要细胞要做透化，可将已固定的细胞直接加入含有去污剂如Triton X-100的缓冲液中孵育。透化结束后，用缓冲液清洗细胞即可进行后续ICC实验。一般用含0.2% Triton X-100的PBS孵育细胞10分钟可以达到良好的透化效果。还可利用预冷的丙酮透化5 分钟，之后用PBS清洗细胞。经验证，即使后继没有进一步的抗体标记，丙酮透化处理也可降低背景信号。