Annexin V-FITC / 7-AAD双染细胞凋亡检测试剂盒

BB-41012
选择规格
  • 20T
  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥800元
  • ¥1200元
  • ¥1900元
数量
产品概述 product description

细胞凋亡是细胞的基本特征之一,它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。 在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧。在体内,巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的PS 从而将这些程序性死亡的细胞清除,因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应,而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。 AnnexinⅤ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的PS高亲和力特异性结合。PS 外翻发生在细胞核破裂,DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前,这使得Annexin V 与PS 的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。

保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.开盖前请离心。
2.开盖后组份按要求条件保存。
3.拆封后请尽快使用完!
有效期
1年
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.方便:可用流式细胞仪或荧光显微镜检测;
2.快速:1小时内即可完成实验;
3.准确:能准确区分活细胞、凋亡细胞和坏死细胞,并计数各群细胞的比例。
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
仪器准备
1.流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS 缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X))
2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.铝箔

使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体损失导致试剂量不够用。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。离心力在不损失细胞的前提下尽可能小,重悬细胞是动作要轻柔,避免多次反复的激烈吹打。不用涡旋振荡器。
3.Annexin V-FITC(等)和Propidium iodide(等)是光敏物质,在操作时请注意避光,尽量减少它们暴露在光下的时间。有必要时可以使用带盖子的冰盒或铝箔纸避光。标记后将细胞保持在避光环境中。移液过程中短暂暴露在光线下(<30秒)是可以接受的。
4.由于细胞凋亡是一个快速和动态的过程,因此最好在染色后立即进行分析。
5.使用Annexin V-FITC(等) 试剂盒检测凋亡需要针对活细胞。不要固定细胞,固定操作会对结果产生干扰。
使用方法
样品染色:
1. 离心收集悬浮细胞。离心机约300×g力,2-8°C,离心时间5分钟,弃培养基。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次。
3. 用400 μl 1X Annexin V结合液重新悬浮细胞,浓度大约为1×106 cells/ml。
4. 在细胞悬浮液中加入5 μl Annexin V-FITC染色液,轻轻混匀后于2-8°C避光条件下孵育15分钟。
5. 加入5-10 μl 7-AAD染色液后轻轻混匀于2-8°C避光条件下孵育2-5分钟。 6. 立即用流式细胞仪或荧光显微镜检测。
常见问题分析
实验过程中Annexin V染不上色或阳性率偏低。可能的原因如下:
1. 用于检测的流式细胞仪/显微镜设置不当。调整使用正确的仪器设置。
2. 确定实验中的诱导剂是否能产生凋亡。可通过设定确切凋亡诱导效果的阳性药物对照来排除这一情况。
3. 细胞未启动凋亡。重新确定诱导后凋亡启动的时间点(时程实验)。
4. 细胞数量偏少。增加细胞数量。
5. 贴壁细胞消化不当。Annexin V 跟PS 的结合需要Ca2+离子,结合液中含有Ca2+,EDTA 的消化会影响染色,建议使用无EDTA 的胰酶,或者消化后用PBS洗涤干净。

实验过程中阳性率偏高。可能的原因如下:
1. 用于检测的流式细胞仪/显微镜设置不当。调整使用正确的仪器设置。
2. 细胞本身活力太差。实验中发现未经诱导凋亡的对照细胞经染色后AnnexinV+/PI+双阳性的细胞比例过高,造成这种结果的原因可能是细胞本身活力太差。建议用台盼蓝染色计算细胞的活力,台盼蓝拒染的细胞应大于95%。若活力偏低低,建议重新复苏细胞,通常刚复苏的细胞至少要传代3 次以后才能进行实验。
参考文献
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