2-8℃

 浓缩管配有2个微量离心管。 在操作过程中，一个可用于收集滤出液，而另一个用于回收浓缩后的样本。

一年

外泌体

1.高回收率 >90%；
2.垂直结构的膜减少了浓差极化，加快离心速度，快达 5 分钟；
3.热密封膜将下游溶出物污染可能性降到最低；
4.100% 完整性检测确保性能可靠；
5.透明外壳和体积刻度方便样品察看；
6.直接吸取样品减少处理步骤；
7.高浓缩倍数：高达80–100 倍

根据需要使用

1.离心机 2.移液器 3.冰箱 4.冰盒

1.PBS缓冲液 2.纯水

1.离心管2.吸头3.一次性手套

 不同的外泌体浓缩的速度不同，有的需要长时间离心，有的则很快就好。和外泌体样品纯度，所用buffer类型，外泌体的浓度有关系。离心时要先短些时间，观察一下浓缩速度； 如果需要多次重复使用，离心速度不要太高； 重复使用时要仔细检查管壁上有没有裂纹； 浓缩管浓缩外泌体会有外泌体损失，样品体积大就分批离心，尽可能不要离心时间太长 样品里的杂质如果可能尽量在离心前去除一些。 浓缩液的样本回收率低可能是由于吸附损失、过度浓缩，或样本穿过滤膜而造成的。 吸附损失取决于溶质浓度、疏水性、与过滤浓缩管表面接触的温度和时间、样本成分及pH。为了最大限度降低损失，离心后请立即回收浓缩后的样本。 如果样本的起始浓度很高，请监控离心过程，以免样本过度浓缩。过度浓缩会导致沉淀，这也可能带来样本损失。 样本有可能穿过滤膜，务必将每次的滤过液一直保留到浓缩的样品分析测试完成。 加外泌体液或Buffer到浓缩管时，可以用蓝枪头；但从浓缩管底吸取浓缩好的目的外泌体时，必须用黄枪头；用枪头伸入浓缩管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜。

清洗浓缩管： 1. 用缓冲液或纯水进行预清洗。也可先用0.1 M NaOH清洗，再用缓冲液或纯水进行二次清洗。 2. 离心管中的过滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用，则让液体保留在滤膜上，直到使用。 浓缩使用方法： 操作步骤： 1. 将内管插入所提供的一个微量离心管中。 2. 向内管中加入不超过500 µl的样本，并盖上盖子。 3. 将盖好盖子的浓缩管放入离心转子中，让盖子的连接带朝着转子的中央；用一个类似的离心管平衡。 4. 以2000-10000 ×g离心约10-30分钟。 5. 离心结束后将整个浓缩管从离心机中取出，取出内管。 6. 为了回收浓缩后的溶质，将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1,000 x g离心2分钟，使浓缩后的样本从浓缩内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。 换液使用方法：使用注意事项： 盐分通过滤膜的过程不依赖样品的浓度和体积，用过滤的方法来脱盐并不改变缓冲液的组成，比如说，含有150 mM盐分的溶液在第一次离心后它的剩余液体盐浓度并不发生改变，依然是150 mM。再往浓缩管中剩余溶液中加入水或无盐缓冲液，再次离心，则会降低溶液中的盐浓度。 这个过程我们将它称为等体积过滤，反复多次地操作，可以使溶液盐分降到最低。 如果我们想将样品用不同组份缓冲液溶解，则我们可以使用等体积过滤达到目的。样品浓缩后，然后加入目的缓冲液，再进行反复的稀释和浓缩。 操作步骤： 1. 把样品置于过滤装置的储液管中； 2. 在特定的离心力下和推荐的时间进行离心； 3. 将滤过液从滤管中取出，放置一旁； 4. 加入需要更换的缓冲液使样品体积达到0.5 ml； 5. 再次离心； 6. 取出滤过液，放置一旁； 7. 再次加入需要更换的缓冲液8. 回收已换液样品。 清洗和保存： 1. 使用后用水冲洗干净； 2. 内管加入超纯水500 µl，5000×g离心5分钟； 3. 净内管中的水，加入500 µl 0.1M NaOH，5000g离心20分钟； 4. 用0.1 M NaOH 浸泡24小时； 5. 用水冲洗干净； 6. 用无菌水浸泡2-8℃保存。 7. 外管用自来水洗净后，用超纯水冲洗干净，晾干。

1.准备做植物外泌体研究，初始样品量需要准备多少？
不同样本外泌体含量差异较大，根据文献选择起始样本量。有条件的情况下尽可能使用多一点样本量。

2.如何鉴定提取的外泌体？
通常使用透射电镜检测（形态）、粒径检测（大小）、外泌体标志蛋白Western blot检测等方法鉴定提取的外泌体。

3.进行外泌体WB鉴定时有什么内参蛋白可供选择？
没有，该检测属于定性检测。

4.蛋白浓度低？
很多样本外泌体量不够下游应用，在条件允许的情况请尽可能加大植物样本的上样量。
处理部分外泌体样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。请选择高质量的蛋白裂解液或蛋白提取试剂盒。

5.外泌体纯化管内管膜会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为内管有死体积，总会有溶液残留在内管中。死体积大约20 μl。

6.可以重复使用过滤管么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是超过8次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。