2-8℃

 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。 试剂拆封后请尽快使用完！

一年

外泌体

1.使用方便，无需超速离心，省时省力；
2.纯度高，富集量大，应用范围广；
3.获取的Exosome结构和功能完整；
4.稳定性好，便于运输，便于保存。

根据需要使用

1.离心机 2.移液器 3.冰箱 4.冰盒

1.PBS缓冲液 2.纯水

1.离心管2.吸头3.一次性手套

 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。 提取液A在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。

1. 提取液准备：每500 μl冷的蛋白提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。每500 μl膜蛋白溶解液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。 2. 待提取外泌体样品中加入100 μl-200 μl冷的试剂 A，充分混匀。 3. 在2-8℃条件下振荡20-40分钟。 4. 将上清吸入另一干净离心管，在37℃水浴5-10分钟。 5. 在37℃，1000×g力离心5分钟，此时溶液分为两层，下层是膜蛋白约为20-50 μl。 6. 小心移除上层液体，收集上层部分留作备用分析。 7. 用50-100 μl冷的试剂B膜蛋白溶解液溶解下层膜蛋白部分，即得膜蛋白。 8. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。 【注】： 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：BB-3401。 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

1.准备做植物外泌体研究，初始样品量需要准备多少？
不同样本外泌体含量差异较大，根据文献选择起始样本量。有条件的情况下尽可能使用多一点样本量。

2.如何鉴定提取的外泌体？
通常使用透射电镜检测（形态）、粒径检测（大小）、外泌体标志蛋白Western blot检测等方法鉴定提取的外泌体。

3.进行外泌体WB鉴定时有什么内参蛋白可供选择？
没有，该检测属于定性检测。

4.蛋白浓度低？
很多样本外泌体量不够下游应用，在条件允许的情况请尽可能加大植物样本的上样量。
处理部分外泌体样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。请选择高质量的蛋白裂解液或蛋白提取试剂盒。

5.外泌体纯化管内管膜会因为离心时间过长而变干么？
不会，因为内管有死体积，总会有溶液残留在内管中。死体积大约20 μl。

6.可以重复使用过滤管么？
可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是超过8次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。

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