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贝博® BBexosomeOUT® 总外泌体（Exosomes）提取试剂盒（血清/血浆用）适用于从各种血清/血浆样品中提取总外泌体。不需要超速离心，仅需通过简单的常规离心即可从样本中获取大量结构完整的外泌体，具有快速简单，提取效率高的特点，可节省更多的实验时间和样本。提取的外泌体可根据实验目的用于后续的多种实验，应用范围广泛。 外泌体是活细胞分泌的来源于晚期核内体(也称为多囊泡体 )的膜性小囊泡，直径约为30-150nm，天然存在于血液、唾液、尿液和母乳等各种体液中，研究发现，Exosome内含有与细胞来源相关的蛋白质、mRNA和microRNA，并且exosome能够通过生物屏障，在细胞间传递功能性核酸分子，从而发挥各种生物学功能。 外泌体囊泡已经成为细胞间通讯的重要介质，参与原核生物和高等真核生物细胞之间的生物信号传递，以调节不同范围的生物过程。外泌体囊泡的病理生理作用开始在包括癌症、感染性疾病和神经变性疾病在内的疾病中得到充分认识，显现了外泌体作为疾病的早期诊断、治疗干预的潜在新靶点的巨大应用前景。此外，未修饰和工程化的外泌体囊泡可能在大分子药物递送中具有应用价值。 传统的血清/血浆中分离和提取exosome的主要方法是超速离心法，这种方法缺点是耗时耗力，往往需要30-70个小时，每次最多只能处理6个样品，需要大量的起始材料，而且产量不高。 贝博® 生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒系列产品，可以通过简单离心快速高效获得高纯度外泌体颗粒。本试剂盒提取的外泌体完好无缺，能用于各种功能研究、蛋白分析及RNA分析等下游应用实验。 本试剂盒按每个样本处理2ml血清/血浆计，每个50T试剂盒大约可以用于提取100ml血清/血浆。如果需要处理大量的血清/血浆，将提取液按说明书标准操作的体积等比例调整即可。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.纯度高，富集量大，应用范围广；
3.获取的Exosome结构和功能完整；
4.稳定性好，便于运输，便于保存。
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
2.一般巨噬细胞、淋巴细胞、造血细胞、胰腺癌细胞等分泌外泌体较多，其它细胞样本建议每个样培养基上清用量不少于8 ml。常规的细胞样本最佳培养上清上样量为15-20 ml及以上，条件允许的情况下采用尽可能多的细胞培养上清。
3.条件允许的情况下可以将细胞培养上清浓缩后再提取外泌体。
1. 收集2ml待提取的血清/血浆样品，置2-8℃保存。
2. 将样品在4℃条件下，3000×g离心15分钟。弃沉淀，收集上清。
3. 小心将上清移入另一干净离心管中。
4. 将样品在4℃条件下，10000×g离心20分钟。弃沉淀，收集上清。
5. 小心将上清移入另一干净离心管中。
6. 在2ml血清/血浆样品中加入2ml提取液A，盖紧离心管盖，上下颠倒混匀1分钟左右，使液体充分混匀。
7. 在4ml液体样品中加入1ml提取液B，盖紧离心管盖，上下颠倒混匀1分钟左右，使液体充分混匀。
8. 置2-8℃冰箱静置过夜。
9. 在4℃条件下，10000×g离心60分钟。
10. 小心移除上清，收集沉淀。
11. 取50-100 μl外泌体保存液将沉淀重悬，即得到外泌体样品。
12. 将外泌体样本-80℃保存或直接用于下游应用。
通常使用透射电镜检测（形态）、粒径检测（大小）、外泌体标志蛋白Western blot检测等方法鉴定提取的外泌体。
Cancer-associated fibroblasts-derived exosomal miR-17-5p promotes colorectal cancer aggressive phenotype by initiating a RUNX3/MYC/TGF-β1 positive feedback loop
Cancer Letters 2020
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