2-8℃

试剂拆封后请尽快使用完！

六个月

1.摇床
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒

1..冰醋酸
2.纯水（超纯）

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

1.背景过深：①显色时间过长；②洗涤不充分；③凝胶中残留物质未去除干净；④纯水的纯度过低。
2.蛋白条带较浅：①蛋白的半胱氨酸含量过低；②银染后水洗时间过长；③蛋白量较低；④固定后的洗涤时间不够，导致乙酸残留。
3.凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹：①凝胶没有被充分浸没，应加入足量溶液；②容器没有清洗干净；③凝胶接触金属物质；④指纹或其他压迹。
4.本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。

1. 试剂制备：
提前配制固定液，按无水乙醇:冰乙酸:纯水=5:1:4的比例配制。
提前配制洗涤液，按无水乙醇:纯水=1:4的比例配制。
2. 水洗：电泳结束后，取凝胶放入纯水中清洗2次，每次5min。
3. 固定：取凝胶放入50～100ml固定液中，在摇床上室温摇动15～20min，重复固定步骤1次。
4. 洗脱：取凝胶放入洗涤液中清洗2次，每次5min。
5. 水洗：纯水清洗凝胶2次，每次5min。
6. 增敏：配制银染增敏工作液，取组分A：Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml加入到50ml纯水中，混匀，即1×Silver Stain Sensitizer，一般应2h内用完。
室温下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝胶2min，立即用纯水清洗凝胶2次，每次1min。
7. 银染：配制银染工作液，取组分B：Silver Stain(100×)0.5ml加入到50ml纯水中，混匀，即得1×Silver Stain，一般应2h内用完。取凝胶入1×Silver Stain，在摇床上室温摇动10～20min。
8. 水洗：弃银染工作液，在摇床上用纯水清洗凝胶2次，每次30s，摇动速度在60～70rpm。总的水洗时间应控制在1.5min内。
9. 显影：配制银染显影工作液，取组分C：Silver Stain Developer(5×)10ml加入到40ml纯水中，混匀，即1×Silver Stain Developer，一般应30min内用完。清洗凝胶后，立即置于1×Silver Stain Developer中，室温孵育2～10min，直至蛋白条带清晰可见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀，继续显影2～3min，亦可延长至5min以上，如果显影效果不佳，可重新更换1×Silver Stain Developer继续显影。
10. 弃银染显色液，迅速用纯水清洗凝胶以避免显影过度，背景染色。立即加入100ml Silver Stain Stop Buffer (1X)，在摇床上室温摇动10分钟，以终止显色反应。摇动速度为60-70rpm。终止时有气体产生属正常现象，产生的气体为二氧化碳。
Silver Stain Stop Buffer (1X)的配制：90ml 纯水中加入10ml Silver Stain Stop Buffer (10X),混匀后即为Silver Stain Stop Buffer (1X)。Silver Stain Stop Buffer (1X)配制后宜当天使用。
11. 弃银染终止液，加入50ml 纯水，在摇床上室温摇动2-5分钟，摇动速度为60-70rpm。短期可在纯水中保存。或采用适当的方式制备成干胶长期保存。