酵母内质网提取试剂盒(低速离心法)

BB-363142
选择规格
  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥1100元
  • ¥1700元
数量
产品概述 product description

内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统,膜片间的隙状空间称为池,通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路,另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关,并且还具有运输蛋白质的功能。 传统的内质网提取方法需要采用较高的离心力或者采用密度梯度离心,对实验室离心机设备要求较高,对实验的操作细致程度要求较高。如果实验室没有能达到50000×g以上的离心力的设备,则没法进行提取。 贝博® BBproExtra® 酵母内质网提取试剂盒(低速离心法)只需要达到20000×g以内的离心力即可提取内质网,一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。 贝博® BBproExtra® 酵母内质网提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种酵母样品中提取总内质网。提取过程简单方便。 本试剂盒不能用于冷冻样品的内质网提取。 贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.酵母内质网提取液B长期不用时-20℃保存。避免反复冻融。 2.酵母洗涤液D长期不用时-20℃保存。 3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
酵母
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.Dounce匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
 预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提前预实验优化实验条件。 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 如果是做核酸类下游应用,实验中所有液体以及器具均应该用DEPC处理。用0.1%的DEPC处理12小时然后高压。 下游用于蛋白质类实验的话可以不用DEPC处理。 细胞最好采用新鲜收集的,或者收集后立即置于-80℃保存的样本。 最好使用标准Dounce匀浆器匀浆,如果没有标准Dounce匀浆器,用普通玻璃匀浆器匀浆也可,但是内质网回收率可能会下降。 离心机转速有相对离心力(RCF,×g)和每分钟转速(RPM,r/min)两种表示方式,有些离心机设置有RPM和×g显示切换,但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算:g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 为有效离心半径,即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度,单位为厘米) 例如: 转速为3000 rpm,有效离心半径为10 cm,则相对离心力(RCF,×g)为=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
使用方法
1. 酵母培养物,在4℃,1000×g条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集酵母沉淀。2. 用PBS洗涤酵母两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。3. 每100 μl体积或100 mg湿重酵母沉淀物中加入400 μl酵母内质网提取液A,混匀后,在30℃条件下保温15分钟。4. 在1000×g条件下离心5-10分钟,收集酵母沉淀。5. 用300 μl酵母洗涤液D重悬细胞,静置10分钟,离心收集酵母。6. 酵母沉淀物中加入500 μl酵母内质网提取液B,充分混匀。7. 在37℃或室温条件下轻微振荡60-90分钟。8. 在2000×g条件下离心5-10分钟,弃上清,收集沉淀。9. 沉淀用300 μl酵母洗涤液D洗涤两次。离心收集沉淀。10. 在沉淀中加入400 μl酵母内质网提取液 C,充分混匀,用Dounce匀浆器匀浆20-30下。11. 将匀浆液在4℃,1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀,收集上清。12. 将上清在4℃,3000×g力条件下离心10分钟,弃沉淀,收集上清。13. 将上清在4℃,12000×g -20000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀,收集上清。。14. 在上清中加入100 μl试剂E,充分混匀。15. 置2-8℃冰箱静置过夜。16. 在4℃条件下,10000×g离心20-45分钟。17. 小心移除上清,收集沉淀。18. 沉淀用适量内质网保存液或其他相应的缓冲液重悬。即得到酵母内质网样品。【注】: 也可不用试剂盒中的内质网保存液重悬,根据实验需要选择合适的缓冲液重悬内质网或直接用于下游实验。19. 置冰箱备用或直接用于下游实验。

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