精子线粒体提取试剂盒

BB-36132
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  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥600元
  • ¥1000元
数量
产品概述 product description

线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化,并通过偶联磷酸化生成ATP,供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的,本试剂盒用简便快速的方法即可在40分钟内提取得到线粒体。 贝博® BBproExtra® 精子线粒体提取试剂盒可用于各种动物精液样本的线粒体提取。 本试剂盒提取的线粒体可以用于各种线粒体功能研究、蛋白提取等下游应用。 最好用于新鲜样品的线粒体提取,由于冷冻样品的线粒体在冻存过程中可能被破坏,提取回收率可能大幅降低。 贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞分析试剂盒。包括细胞凋亡、活性、增殖、毒性、活性氧、周期、细胞代谢、氧化应激、膜流动性、膜电位、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、胞外酸化、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种细胞检测试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以为您提供各种细胞成像、细胞示踪与追踪试剂盒产品。包括各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。 贝博® BBcellProbe® 可以提供各种细胞、组织染色,免疫组织化学,细胞培养等相关试剂盒产品。

保存温度
2-8℃
注意事项
试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
精子
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.Dounce匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
 预实验很重要。必须要做预实验,在正式实验之前取少量样本优化实验条件,并像正式样本一样认真进行,看实验结果是否可行,实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性,不同样本的实验条件通常差异较大,同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同,为了避免浪费正式样本和试剂,一定要提前预实验优化实验条件。 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 最好使用标准Dounce匀浆器匀浆,如果没有标准Dounce匀浆器,用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可,但是线粒体回收率会下降。 用Dounce匀浆器匀浆匀浆是线粒体提取的关键的步骤,故匀浆前最好先通过预实验确定不同组织样本的最适匀浆次数,方法是每匀浆 5-10 次后,取 2-3 uL 匀浆液到载玻片上,然后在显微镜下观察,完整细胞数量降低到 20%以下为佳。此镜检步骤非必须步骤,但是会影响线粒体的回收率。在样本极难获取的实验中,务必做镜检。
使用方法
1. 取0.5 ml-1 ml新鲜精液,在室温或37℃静置30-60分钟。2. 在完全液化的精液中加入0.5 ml提取液A,充分混匀。3. 在4℃,3000×g条件下离心10分钟,小心吸取上清,尽可能吸干,留沉淀。4. 在沉淀中加入500 μl冷的试剂 A重悬沉淀,3000×g条件下离心10分钟,弃上清,留沉淀。5. 在沉淀中加入500 μl冷的试剂 B重悬沉淀,置冰上5分钟。6. 用Dounce匀浆器匀浆30-60下。【注】: 先用Dounce匀浆器的松型槌初步匀浆10-30次,再用紧型槌匀浆20-30次。 每上下一个来回为一次。7. 在4℃,500×g条件下离心5分钟。将上清吸入另一预冷的干净离心管,弃沉淀。8. 将上清在4℃,1000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀,收集上清。9. 将上清在4℃,2000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀,收集上清。10. 将上清在4℃,5000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀,收集上清。11. 将上清在4℃,12000×g力条件下离心15分钟。弃上清,收集沉淀。12. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂C,轻轻混匀。13. 在4℃,12000×g力条件下离心15分钟。弃上清,留沉淀。14. 沉淀用线粒体保存液D重悬。即得到线粒体样品,置冰箱备用或直接用于下游实验。【注】: 可以不用试剂盒中提供的保存液。 根据实验需要用自己的其他缓冲液保存或直接用于蛋白裂解/线粒体染色等下游实验。 线粒体保存液中保存的线粒体可以于12000×g离心15分钟重新收集沉淀。 3天内使用可以4℃保存。长期保存须-20℃以下冻存。
常见问题分析
 线粒体量少?增加匀浆器匀浆次数。需要足够的精子样品的上样量。 提取的线粒体具有活性吗?本试剂盒提取的线粒体均保持其天然结构和活性。
参考文献
Lycopene restores the effect of ischemic postconditioning on myocardial ischemia‑reperfusion injury in hypercholesterolemic ratsInternational Journal of Molecular Medicine 2019  Xiao Jiang et al. Overexpression of augmenter of liver regeneration (ALR) mitigates the effect of H2O2-induced endoplasmic reticulum stress in renal tubule epithelial cellsApoptosis 2019  Tao Li et al. Polydatin mediates Parkin-dependent mitophagy and protects against mitochondria-dependent apoptosis in acute respiratory distress syndromeLaboratory Investigation 2019  Jie Ouyang et al.SIRT3 Inactivation Promotes Acute Kidney Injury Through Elevated Acetylation of SOD2 and p53Journal of Surgical Research 2019  Zhenhua Zeng et al.Polydatin Protecting Kidneys against Hemorrhagic Shock-Induced Mitochondrial Dysfunction via SIRT1 Activation and p53 DeacetylationOxidative Medicine and Cellular Longevity 2016  Wei Xiong et al.Moderate hypothermia ameliorates enterocyte mitochondrial dysfunction in severe shock and reperfusionJournal of Surgical Research 2016

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