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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 微藻细胞核提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种真核类微藻中提取细胞核。此试剂盒提供了一个系统，维持核组分是分开和完整的。优化的试剂配方和程序可以快速分离胞核，而绝少交叉污染。 本试剂盒适用于常见的各种绿藻、金藻、硅藻、甲藻、螺旋藻等单细胞、多细胞、丝状体、多核体等形态真核类藻类。配合适当方法调整，也可以用于蓝藻等原核藻类的细胞器提取。 本试剂盒提取的胞核组分仍保持其生化功能，适合各种下游分析如核蛋白提取、转录活性，RNA拼接，gel－shift分析，报告分析，酶活性分析和WB等。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.提取液AC D 2-8℃保存；
2.提取液B -20℃保存。
2.提取液B -20℃保存。
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
藻类
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
使用方法
1. 提取液制备：
每500 μl冷的提取液A中加入10 μl提取液B，混匀后置冰上备用。
2. 取培养好的微藻样品，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用PBS洗涤微藻细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每300 μl体积或300 mg湿重微藻细胞沉淀物中加入500 μl酵母提取液D，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
5. 在1000×g条件下离心5-10分钟，移除上清，收集微藻沉淀。
6. 用PBS洗涤微藻细胞沉淀一次，1000×g离心5分钟，收集细胞，洗涤后尽可能吸干上清。
7. 用提取液A重悬微藻细胞。每300 μl细胞（沉淀体积）中加入1 ml提取液A。
8. 将微藻细胞悬液置振荡器上37℃-55℃振荡24-72小时。
9. 离心力1000×g离心5分钟，将上清移入另一离心管保存备用，收集细胞沉淀。
10. 用PBS洗涤微藻细胞沉淀一次，1000×g离心5分钟，收集细胞，洗涤后尽可能吸干上清。
11. 在微藻细胞沉淀中加入1 ml试剂C重悬细胞，混匀。
12. 将细胞悬液置振荡器上振荡20-30分钟。
13. 离心力2000×g离心5分钟，弃上清，收集沉淀。
14. 用PBS洗涤沉淀1-2次。
15. 沉淀即为微藻细胞核。将上述微藻细胞核沉淀用适当缓冲液重悬后2-8℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
每500 μl冷的提取液A中加入10 μl提取液B，混匀后置冰上备用。
2. 取培养好的微藻样品，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用PBS洗涤微藻细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每300 μl体积或300 mg湿重微藻细胞沉淀物中加入500 μl酵母提取液D，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
5. 在1000×g条件下离心5-10分钟，移除上清，收集微藻沉淀。
6. 用PBS洗涤微藻细胞沉淀一次，1000×g离心5分钟，收集细胞，洗涤后尽可能吸干上清。
7. 用提取液A重悬微藻细胞。每300 μl细胞（沉淀体积）中加入1 ml提取液A。
8. 将微藻细胞悬液置振荡器上37℃-55℃振荡24-72小时。
9. 离心力1000×g离心5分钟，将上清移入另一离心管保存备用，收集细胞沉淀。
10. 用PBS洗涤微藻细胞沉淀一次，1000×g离心5分钟，收集细胞，洗涤后尽可能吸干上清。
11. 在微藻细胞沉淀中加入1 ml试剂C重悬细胞，混匀。
12. 将细胞悬液置振荡器上振荡20-30分钟。
13. 离心力2000×g离心5分钟，弃上清，收集沉淀。
14. 用PBS洗涤沉淀1-2次。
15. 沉淀即为微藻细胞核。将上述微藻细胞核沉淀用适当缓冲液重悬后2-8℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
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