2-8℃

试剂拆封后请尽快使用完！

一年

提取

植物

1.使用方便。 2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。 3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。 4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

根据需要使用

1.离心机2.振荡器3.Dounce匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒

1.PBS缓冲液

1.离心管2.吸头3.一次性手套

 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。

1. 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200-400 mg植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入1-2 ml PBS后用匀浆机充分匀浆或者加适量PBS后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。2. 将匀浆液用100 μm细胞筛过滤；【注】： 没有细胞筛的话，在4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，或者以低于100g力条件下离心1分钟，收集细胞上清，弃组织沉淀。 有些含黏液较多的样品可能难以吸取，可以将1ml吸头尖稍微剪掉一点使用。3. 将滤液在2000×g条件下离心5-10分钟，收集沉淀。4. 在沉淀中加入500 μl提取液A，充分混匀。【注】： 培养细胞1000×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞后用PBS洗涤2次，然后直接加入提取液A重悬。 大约每300ul细胞压积中加入1ml提取液A。 一般加入样本体积的2-3倍体积的提取液A，充分淹没样本即可。5. 将细胞悬液置振荡器上37℃或室温振荡12-72小时。【注】： 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。 不同类型的植物样本需要处理的时间差异较大。拟南芥较易处理，鲜嫩叶片较易处理，年龄小的样本处理时间短。拟南芥嫩叶最短4小时即可。 部分细胞壁较厚的植物类型可能需要处理更长时间。可以延长至72小时以上处理以提高核得率。6. 在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀。7. 在沉淀中加入500 μl-1 ml提取液B，用匀浆器充分匀浆，在匀浆液中补充提取液B至1 ml，充分混匀。8. 置振荡器振荡5-10分钟。【注】： 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡，置4℃静置，稍微延长处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。9. 在2000×g条件下离心10分钟，弃上清，收集沉淀，即为细胞核。10. 用用细胞核保存液C或者其它相应的缓冲液重悬细胞核，置冰箱备用或直接用于下游实验。【注】： 可以不用试剂C。 根据下游实验需要选择重悬液。 保存液中的细胞核可以2000×g条件下离心10分钟重新回收。