叶绿体核糖体提取试剂盒-非酶法

BB-36065
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产品概述 product description

高等植物中有两类核糖体：一类为原核型的，存在于叶绿体与线粒体中；另一类为真核型的，存在于细胞质中。核糖体是细胞进行蛋白质生物合成的部位,同时又与生物体的若干性状，如抗性突变有关。随着高等植物分子生物学的发展,分离、鉴定并利用这些核糖体显得日益重要。 贝博® BBproExtra® 叶绿体核糖体提取试剂盒用简便快速的方法即可快速提取得到叶绿体核糖体。 本试剂盒适用于提取新鲜植物样本的叶绿体核糖体，用于冻存样本的提取时由于冻存过程中大部分叶绿体可能会被破坏，叶绿体核糖体回收率较低。 贝博® BBproExtra® 叶绿体核糖体提取试剂盒提取的叶绿体核糖体具有生物活性，可以用于叶绿体核糖体功能研究、蛋白提取等各种下游应用。 本试剂盒采用非酶法的快速提取方法，可以快速提取得到叶绿体核糖体，但是回收率比酶法叶绿体核糖体提取试剂盒稍低。需要酶法提取试剂盒可以联系贝博选择其他货号的试剂盒（相关产品BB-36066），酶法提取得到的叶绿体核糖体回收率会有增加，但是耗时较长，对蛋白质有破坏。请根据不同的需要选择试剂盒。 本试剂盒需要使用170000×g的离心力，没有相应离心机的话可以选择低速离心法的试剂盒，低速离心法试剂盒只需要达到20000×g以内的离心力即可提取，一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。低速离心法试剂盒提取得到的叶绿体核糖体纯度相对于高速离心法的较低，回收率相当。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
2-8℃保存；
长期不用 -20℃保存。
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
植物
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套 4.细胞筛
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
使用方法
1. 取500 mg-1 g新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
2. 加入2 ml 试剂A用组织搅碎机/匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3. 将匀浆液用100 μm细胞筛过滤。
4. 将滤液在300×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
5. 将上清液在3000×g条件下离心15分钟，弃上清，收集沉淀。
6. 在沉淀中加入0.5 ml提取液B，充分混匀。
7. 置振荡器振荡20分钟。
8. 在200×g力离心2分钟。弃沉淀，取上清。
9. 在1000×g力离心2分钟。弃沉淀，取上清。
10. 将上清3000×g力离心15分钟。弃上清，留沉淀。
11. 在沉淀中加入500 μl试剂C，充分混匀。
12. 在2-8℃振荡15分钟。
13. 在3000×g力离心5分钟。弃沉淀，取上清。
14. 在10000×g力离心10分钟。弃沉淀，取上清。
15. 将上清在4℃，170000×g力条件下离心60分钟。弃上清，沉淀即为叶绿体核糖体。
16. 用400 μl叶绿体核糖体保存液或其他相应的缓冲液重悬沉淀，置冰箱备用或直接用于下游实验。

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