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产品概述
product description
溶酶体是由一层单位膜包围，内含多种酸性水解酶的泡状结构。溶酶体含有40多种水解酶，其中包括蛋白酶、核酸降解酶和糖苷酶等。其主要功能是对细胞内物质的消化作用。此外溶酶体与器官形成、激素分泌的调节以及某些疾病的发生密切相关。 贝博® BBproExtra® 溶酶体提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本的溶酶体提取。提取的溶酶体具有生物活性，可以用于溶酶体功能研究、溶酶体染色、溶酶体蛋白提取等各种下游应用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.长时间不使用可以-20℃储存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
动物细胞/组织
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，也可用普通玻璃匀浆器匀浆，但是溶酶体回收率会下降。
4.若实验室离心机较小达不到30000×g离心力，或者离心管质量不能承受30000×g离心力，请使用能达到的最大离心力。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，也可用普通玻璃匀浆器匀浆，但是溶酶体回收率会下降。
4.若实验室离心机较小达不到30000×g离心力，或者离心管质量不能承受30000×g离心力，请使用能达到的最大离心力。
使用方法
细胞溶酶体提取：
1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 加入400 μl冷的试剂 A，置冰上静置10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。
5. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，5000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。
10. 在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
11. 沉淀用溶酶体保存液C重悬。
12. 即得到溶酶体样品，置冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织溶酶体提取：
1. 取50-100 mg新鲜动物组织样本，用PBS清洗干净。
2. 用手术剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 加入400 μl冷的试剂 A，置冰上静置10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。
5. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，5000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。
10. 在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
11. 沉淀用溶酶体保存液C重悬。
12. 即得到溶酶体样品，置冰箱保存备用或直接用于下游实验。
1. 取1-2×107个细胞，在4℃，500×g条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
2. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 加入400 μl冷的试剂 A，置冰上静置10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。
5. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，5000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。
10. 在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
11. 沉淀用溶酶体保存液C重悬。
12. 即得到溶酶体样品，置冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织溶酶体提取：
1. 取50-100 mg新鲜动物组织样本，用PBS清洗干净。
2. 用手术剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 加入400 μl冷的试剂 A，置冰上静置10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。
5. 匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，5000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入400 μl冷的试剂B，混匀。
10. 在4℃，20000-30000×g力条件下离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
11. 沉淀用溶酶体保存液C重悬。
12. 即得到溶酶体样品，置冰箱保存备用或直接用于下游实验。
参考文献
1.Tao Wen, et al.
Ultra-small platinum nanoparticles on gold nanorods induced intracellular ROS fluctuation to drive megakaryocytic differentiation of leukemia cells
Biomaterials Science 2020 （IF=6.183）
2.Wenmin Deng, et al.
Disulfiram suppresses NLRP3 inflammasome activation to treat peritoneal and gouty inflammation
Free Radical Biology and Medicine 2020 （IF=5.657）
3.Si Chen, et al.
27-Hydroxycholesterol Contributes to Lysosomal Membrane Permeabilization-Mediated Pyroptosis in Co-cultured SH-SY5Y Cells and C6 Cells
Front Mol Neurosci. 2019; 12: 14. （IF=3.902）
Ultra-small platinum nanoparticles on gold nanorods induced intracellular ROS fluctuation to drive megakaryocytic differentiation of leukemia cells
Biomaterials Science 2020 （IF=6.183）
2.Wenmin Deng, et al.
Disulfiram suppresses NLRP3 inflammasome activation to treat peritoneal and gouty inflammation
Free Radical Biology and Medicine 2020 （IF=5.657）
3.Si Chen, et al.
27-Hydroxycholesterol Contributes to Lysosomal Membrane Permeabilization-Mediated Pyroptosis in Co-cultured SH-SY5Y Cells and C6 Cells
Front Mol Neurosci. 2019; 12: 14. （IF=3.902）
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