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产品概述
product description
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器。细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。对线粒体结构与功能的研究通常是在离体的线粒体上进行的，本试剂盒用简便快速的方法即可在40分钟内提取得到线粒体。 贝博® BBproExtra® 组织线粒体提取试剂盒可用于各种动物实体软、硬组织样本的线粒体提取。 最好用于新鲜样本的线粒体提取，用于冷冻样品的线粒体提取时回收率较低。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。可以提供针对不同下游实验应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。 贝博® BBproExtra® 还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
提取
适用样本
动物组织
产品应用
根据需要使用
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，线粒体回收率会下降。
4.用Dounce匀浆器匀浆匀浆是线粒体提取的关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定不同组织样本的最适匀浆次数，方法是每匀浆 5-10 次后，取 2-3 uL 匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到 20%以下为佳。此镜检步骤非必须步骤，但是会影响线粒体的回收率。在样本极难获取的实验中，务必做镜检。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，线粒体回收率会下降。
4.用Dounce匀浆器匀浆匀浆是线粒体提取的关键的步骤，故匀浆前最好先通过预实验确定不同组织样本的最适匀浆次数，方法是每匀浆 5-10 次后，取 2-3 uL 匀浆液到载玻片上，然后在相差显微镜下观察，完整细胞数量降低到 20%以下为佳。此镜检步骤非必须步骤，但是会影响线粒体的回收率。在样本极难获取的实验中，务必做镜检。
使用方法
1. 取50-100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
2. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 加入500μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40次。
5. 然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，11000×g离心20分钟。弃上清，留沉淀。
7. 在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
8. 在4℃，11000×g离心20分钟。弃上清，留沉淀。
9. 沉淀用线粒体保存液重悬。
10. 即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
2. 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
3. 加入500μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。
4. 用Dounce匀浆器匀浆30-40次。
5. 然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
6. 将上清在4℃，11000×g离心20分钟。弃上清，留沉淀。
7. 在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
8. 在4℃，11000×g离心20分钟。弃上清，留沉淀。
9. 沉淀用线粒体保存液重悬。
10. 即得到线粒体样品，置冰箱备用或直接用于下游实验。
参考文献
1.Lian Duan Changbin Liang Xuying Li, et al.
Lycopene restores the effect of ischemic postconditioning on myocardial ischemia‑reperfusion injury in hypercholesterolemic rats
International Journal of Molecular Medicine 2019 （IF=2.784）
2.Shuang Liu Nan Wu Jiaxin Miao, et al.
Protective effect of morin on myocardial ischemia‑reperfusion injury in rats
INT J MOL MED 2018 （IF=2.784）
Lycopene restores the effect of ischemic postconditioning on myocardial ischemia‑reperfusion injury in hypercholesterolemic rats
International Journal of Molecular Medicine 2019 （IF=2.784）
2.Shuang Liu Nan Wu Jiaxin Miao, et al.
Protective effect of morin on myocardial ischemia‑reperfusion injury in rats
INT J MOL MED 2018 （IF=2.784）
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