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保存温度
2-8℃
注意事项
1.长期不用-20℃储存。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
仪器准备
1.移液器
2.冰箱
3.冰盒
2.冰箱
3.冰盒
试剂准备
纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.ECL工作液配制过程中吸取试剂A和试剂B时务必跟换吸头，工作液新鲜配制后立即使用，放置过久会影响灵敏度。
2.根据蛋白丰度不同曝光时间可能是数秒至数小时。
3.曝光时间过长会使背景加深，曝光不足会导致条带模糊。
4.如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
5.必须使用高质量保鲜膜。
2.根据蛋白丰度不同曝光时间可能是数秒至数小时。
3.曝光时间过长会使背景加深，曝光不足会导致条带模糊。
4.如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL发光和曝光。
5.必须使用高质量保鲜膜。
使用方法
1. 使用合适的方法进行 Western，直至用PBST洗涤二抗。
2. 配制新鲜ECL工作液：试剂A和试剂B按1:1混合均匀后即为ECL工作液。
3. 印迹膜蛋白面朝上，用ECL工作液均匀滴加至印迹膜使其完全覆盖。ECL工作液使用量大约为0.125ml/cm2膜或根据个人实验习惯使用。
4. 用平头镊夹住印迹膜，垂直置于吸水纸以吸去自然流下的多余工作液，注意不能让膜完全干掉。
5. 快速将印迹膜置于二层保鲜膜之间，尽量赶尽气泡。
6. 将印迹膜蛋白面朝上，放于X光胶片暗盒内。（如果用显像仪器直接置于仪器中拍照即可）
7. 在暗室内放入X光片，曝光，显影。如果在暗室中可肉眼看到比较亮的条带，建议曝光1分钟-3分钟；如果肉眼看到的带比较淡，建议曝光3-10分钟；如果很淡或基本看不到带，建议曝光10分钟-30分钟。
常见问题分析
1.为什么会发生光淬灭？
抗原浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗原上样量。
操作时间过长，膜逐渐干掉。避免膜干掉。
不良的实验习惯导致设备或试剂污染。例如铁锈和不慎沾染的显影液、定影液，会造成光淬灭，甚至直接导致无荧光。
抗原浓度太高，局部过多的HRP会快速消耗底物，导致光信号过强，条带呈灼烧样。可降低抗原上样量。
操作时间过长，膜逐渐干掉。避免膜干掉。
不良的实验习惯导致设备或试剂污染。例如铁锈和不慎沾染的显影液、定影液，会造成光淬灭，甚至直接导致无荧光。
参考文献
1.Ouyang Chen, Zhouheng Ye et al.
Methane attenuates myocardial ischemia injury in rats through anti-oxidative, anti-apoptotic and anti-inflammatory actions
Free Radical Biology and Medicine 2016 （IF=5.784）
2.Guoming Zhang, Song Gao et al.
Pharmacological Postconditioning with Lactic Acid and Hydrogen Rich Saline Alleviates Myocardial Reperfusion Injury in Rats
Scientific reports 2015 （IF=5.228）
3.Hao Liua, Anmin Chena et al.
A short-hairpin RNA targeting osteopontin downregulates MMP-2 and MMP-9 expressions in prostate cancer PC-3 cells
Cancer Letters 2010 Volume 295, Issue 1, Pages 27-37 （IF=6.508）
Methane attenuates myocardial ischemia injury in rats through anti-oxidative, anti-apoptotic and anti-inflammatory actions
Free Radical Biology and Medicine 2016 （IF=5.784）
2.Guoming Zhang, Song Gao et al.
Pharmacological Postconditioning with Lactic Acid and Hydrogen Rich Saline Alleviates Myocardial Reperfusion Injury in Rats
Scientific reports 2015 （IF=5.228）
3.Hao Liua, Anmin Chena et al.
A short-hairpin RNA targeting osteopontin downregulates MMP-2 and MMP-9 expressions in prostate cancer PC-3 cells
Cancer Letters 2010 Volume 295, Issue 1, Pages 27-37 （IF=6.508）
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