双缩脲蛋白定量试剂盒

BB-3422
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产品概述 product description

双缩脲是一种用于分析蛋白质的方法，双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下，肽键与铜离子结合，生成蓝紫色的化合物，此化合物在540nm的吸光度与肽键的数量呈正比例关系，因此可计算出蛋白质的含量。 双缩脲法测蛋白浓度兼容性亦很好，不受大部分样本中其他成分的影响，但易受铜离子螯合剂的影响。另外，对于血清总蛋白的双缩脲分析，胆红素、脂类、血红蛋白、葡聚糖具有一定干扰作用。 双缩脲法在5～160mg/ml浓度范围内有较好的线性关系。 本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白标准配制成溶液后要-20℃保存。

有效期
一年
检测方法
酶标仪或分光光度计
适用样本
蛋白样本
产品应用
蛋白定量
仪器准备
1.酶标仪或分光光度计
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒


试剂准备
1.纯水 2.生理盐水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.96孔板
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.蛋白标准粉末溶解于蛋白标准配制液后，即获得蛋白标准原液；该原液中含有防腐剂，不影响后续检测，该蛋白标准原液-20℃长期保存；
3.待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂A 后，如果发现检测效果不佳，可以室温放置1h或60℃放置15min，颜色会随着时间的延长而不断加深；
4.测定标准曲线时发现随着标准品浓度的增加，吸光度或颜色没有明显变化，可能的原因是样品中含有铜离子螯合剂；
5.蛋白浓度低于20mg/ml时，颜色反应呈不明显的蓝色；当大于40mg/ml时，即可呈现明显的蓝紫色反应；
6.本试剂盒的线性范围是5~160mg/ml，样品蛋白浓度应大于1mg/ml，以20mg/ml上为宜；如果需测定低浓度蛋白样品（1mg/ml），请选择BCA蛋白定量试剂盒（BB-3401）；
7.本产品反应生成的蓝紫色的化合物的吸光度，与试剂批次、pH值、反应温度有关；因此建议，每次测定都做标准对照；
8.氨基酸和二肽不发生双缩脲反应，三肽、寡肽和多肽与铜离子的双缩脲复合物，呈粉红色-紫红色，与蛋白质的双缩脲反应结果不同；
9.如果没有酶标仪，也可以使用分光光度计测定。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量会显著减少；
10.检测中发现所有孔都呈暗紫色，可能原因是样品中含有还原剂，应适当透析或稀释样品。
使用方法
1. 取0.25ml蛋白标准配制液C或稀释液加入到40mg的蛋白标准B中，充分溶解后配制成蛋白标准溶液（160mg/ml），配制后可立即使用；溶解后的蛋白标准应-20℃保存。也可根据需要进行稀释，如稀释至40mg/ml；
2. 将标准品按0,1，2,4,8,12,16,20ul加到96孔板的标准孔，加稀释液补足至20ul；
3. 加适当体积待测蛋白样本到96孔板的样品孔中。
4. 各孔中加入200ul双缩脲试剂A，室温静置10~15min；
5. 测定540nm波长处的吸光值，如无540nm，510~562nm之间的波长也可；
6. 根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度；

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