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贝博® BBproExtra® Lowry法蛋白定量试剂盒检测原理是，在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物，Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被复合物蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色，在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比，可根据750nm的光吸收值大小计算蛋白质的含量。 通过测定750nm的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 本试剂盒采用牛血清白蛋白（BSA）溶液作为蛋白质标准品溶液。 本试剂盒最小检测蛋白量可达0.2μg，检测浓度下限达到10μg/mL。 本试剂盒测定范围为20～2000 μg/ml，在此范围内有较好的线性。 如需检测Lowry法背景值较高而不适合Lowry法的样品，可以选用贝博BCA或Bradford蛋白定量试剂盒（相关产品BB-3401/3411）。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
2.试剂拆封后请尽快使用完！
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒
2.吸头
3.一次性手套
4.96孔板
2.待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中，否者待测蛋白与蛋白标准中所含非蛋白成分不一致，有可能导致测定不准确。
3.如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑根据比色皿的最小检测体积。应按比例适当加大改良Lowry Reagent工作液的用量使总体积不小于最小检测体积，样品和标准品的用量亦相应按比例放大。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量会显著减少。
4.建议所以样品(包括标准品)采用三复孔，求平均值。
1. Folin-Ciocalteu Reagen工作液配制：
根据样品数量，按Folin-Ciocalteu Reagent:纯水 =1：1的比例配制Folin-Ciocalteu工作液，充分混匀。
2. Lowry工作液配制：
临用前，根据样品数量，按Lowry B1:B2:B3=50:1:1比例配制改良Lowry Reagent工作液，即配即用。
总Lowry工作液体积=（标准品+待测样品）×每个样品所需要的Lowry工作液×重复数
3. 蛋白标准工作液配制：
取1ml蛋白标准配制液加入到蛋白标准(BSA)(20mg)中，充分溶解后配制成20mg/ml的蛋白标准溶液，配制后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。
取适量20mg/ml蛋白标准，稀释至终浓度为1500ug/ml或所需浓度。如取75ul 20mg/ml蛋白标准，加入925ul稀释液，充分混匀，即配制成1500ug/ml蛋白标准。
蛋白检测：
1. 将1500ug/ml蛋白标准用稀释待测样品的溶液5倍梯度稀释，浓度分别为300μg/ml、60μg/ml、12μg/ml、2.4μg/ml、0μg/ml。
2. 各取40ul加到96孔板的标准品孔。
3. 加40μl待测蛋白样品或稀释液(空白对照)到96孔板的样品孔中，如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液不同，应在待测蛋白样本孔中加入40ul稀释液；如果标准品稀释液与溶解待测蛋白样本的溶液相同，无需在待测蛋白样本孔中加入40ul稀释液。
4. 用多通道微量移液器快速将200μl 配制好的改良Lowry Reagent工作液加入至各孔，立即在96孔板混匀器上充分混匀或手动轻轻混匀30s。室温准确孵育10分钟。
5. 用多通道微量移液器快速将20μl新鲜配制的Folin-Ciocalteu工作液加至上述各孔中，立即在96孔板混匀器上混匀或手动轻轻混匀30s。加盖以防止液体挥发，室温准确孵育30分钟。
6. 轻轻混匀96孔板，酶标仪测定750nm处吸光度，
7. 对比标准曲线，求得相应待测样品的蛋白浓度。
建议每次测定时都做标准曲线。因为Lowry法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。
2.测定时发现随着浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。
可能的原因是样品中含有严重干扰Lowry法测定蛋白浓度的物质。
3.待测样品一定需要稀释吗？
不一定。对于样本来说，需不需要稀释取决于样本的检测值是否落在标准曲线范围内，如果样本浓度超过试剂盒的最高的检测限，那么样本是需要稀释后检测的。
Evaluation of Insulin-mediated Regulation of AKT Signaling in Childhood Acute Lymphoblastic Leukemia
Journal of Pediatric Hematology Oncology 2019 （IF=1.060）
2.Yujiao He, Junmei Huang, Ping Wang et al.
Emodin potentiates the antiproliferative effect of interferon α/β by activation of JAK/STAT pathway signaling through inhibition of the 26S proteasome
Oncotarget 2016 （IF=5.008）
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