2-8℃

1.蛋白标准品注意防止微生物污染。避免反复冻融。
2.可以根据需要将蛋白标准分装后冻存。
3.试剂拆封后请尽快使用完！

一年

酶标仪或分光光度计

蛋白样本

蛋白定量

1.酶标仪或分光光度计
2.移液器
3.冰箱
4.冰盒

1.纯水 2.生理盐水

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.96孔板

在低温条件或长期保存导致BCA试剂出现沉淀时，可搅拌或37℃温育使溶解。如发现细菌污染则应丢弃，避免对实验结果造成影响。

试剂配制：
1. BCA工作液配制：
根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B（50:1）配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml BCA试剂A加100μl BCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。
总BCA工作液体积=（标准品+待测样品）×每个样品所需要的BCA工作液×重复数

2. 蛋白标准工作液配制：
 根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用纯水5倍稀释，配成

蛋白检测：
96孔微孔板测定：
1. 标准曲线绘制。
取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：
2. 按上表数据在作好标记的96孔板微孔中稀释好蛋白标准品并充分混匀。
3. 样品检测。分别在作好标记的其它待测孔加好20ul待测蛋白样品（原液或稀释液）。
4. 在标准曲线孔和待测样品孔分别每孔加入200ul BCA工作液。充分混匀。
5. 盖上96孔板盖，37℃放置30分钟。
6. 在5分钟内完成酶标仪检测。
7. 用酶标仪测定A562，以不含BSA的光吸收值（0号孔）为空白对照。
8. 以蛋白含量（g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
9. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得待测样品的蛋白含量。
10. 计算蛋白浓度：
以查得的蛋白含量除以样品体积20l，再乘以样品检测前相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。

比色皿测定
1. 标准曲线绘制。
在比色皿/试管中，按以下表格数据加入试剂：
2. 按上表数据在作好标记的比色皿中稀释好蛋白标准品并充分混匀。
3. 样品检测。分别在作好标记的其它待测比色皿中加好100ul待测蛋白样品（原液或稀释液）。
4. 在标准曲线孔和待测样品孔分别每孔加入2ml BCA工作液。充分混匀。
5. 37℃放置30分钟。
6. 在5分钟内完成分光光度计检测。
7. 以不含BSA的光吸收值（0号孔）为空白对照，用分光光度计测定A562。
8. 以蛋白含量（g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
9. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得待测样品的蛋白含量。
10. 计算蛋白浓度：
以查得的蛋白含量除以样品体积100l，再乘以样品检测前相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。

1.是否每次测定时都需要做标准曲线？
建议每次测定时都做标准曲线。因为BCA法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，所以除非精确控制显色反应的时间和温度，否则如需精确测定宜每次都做标准曲线。

2.测定时发现随着浓度的增加吸光度或颜色没有明显变化。
可能的原因是样品中含有严重干扰BCA法测定蛋白浓度的物质，请参考详细的BCA法的兼容性列表。

3.待测样品一定需要稀释吗？
不一定。对于样本来说，需不需要稀释取决于样本的检测值是否落在标准曲线范围内，如果样本浓度超过试剂盒的最高的检测限，那么样本是需要稀释后检测的。

1.Haobo Han, et al.
Nucleobase-modified polyamidoamine-mediated miR-23b delivery to inhibit the proliferation and migration of lung cancer
Biomaterials Science 2017 （IF=5.831）
2.Yan Li, et al.
Tat PTD-Endostatin-RGD: A novel protein with anti-angiogenesis effect in retina via eye drops
Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - General Subjects 2016 （IF=5.083）
3.Yujiao He, et al.
Emodin potentiates the antiproliferative effect of interferon α/β by activation of JAK/STAT pathway signaling through inhibition of the 26S proteasome
Oncotarget 2016 （IF=5.008）

4.Zhengfu Tai, Yuan Lin et al.
Luteolin sensitizes the antiproliferative effect of interferon α/β by activation of Janus kinase/signal transducer and activator of transcription pathway signaling through protein kinase A-mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase SHP-2 in cancer cells
Cellular Signalling 2014 （IF=4.191）

5.Quan Q, Wang J, Li X, Wang Y et al.
Ginsenoside Rg1 Decreases Aβ1–42 Level by Upregulating PPARγ and IDE Expression in the Hippocampus of a Rat Model of Alzheimer's Disease
PLoS ONE 2013 （IF=4.092）