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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 变性蛋白裂解液采用优质原料配制，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典常用的细胞组织快速裂解液。 变性蛋白裂解液含有SDS，裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western等下游实验，不可用于co-IP实验。如下游需要直接用于co-IP实验，请使用贝博其他货号的裂解液（相关产品BB-3204）。 贝博® 变性蛋白裂解液中已含常用磷酸酶抑制剂。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
1年
检测方法
WB、IP等
适用样本
细胞、组织
产品应用
WB、IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒 7.匀浆机/匀浆器
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒 7.匀浆机/匀浆器
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
离心管
吸头
一次性手套
吸头
一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
使用方法
A． 细胞裂解
1. 裂解液制备：每1ml冷的裂解液中加入4ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106个细胞中加入500ul冷的裂解液（每106个细胞，大约10mg或10ul压积，加100ul 裂解液。大约相当于6孔板的每孔加入100ul~150ul，或一个75 cm2培养瓶加1 ml。裂解液和细胞应充分接触。如果裂解液不足量，细胞裂解效率将会降低），混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
B． 组织裂解
1. 裂解液制备：每1ml冷的裂解液加入4ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100mg组织样本剪碎，加入1ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡15-20分钟。
4. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
6. 上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
1. 裂解液制备：每1ml冷的裂解液中加入4ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106个细胞中加入500ul冷的裂解液（每106个细胞，大约10mg或10ul压积，加100ul 裂解液。大约相当于6孔板的每孔加入100ul~150ul，或一个75 cm2培养瓶加1 ml。裂解液和细胞应充分接触。如果裂解液不足量，细胞裂解效率将会降低），混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
B． 组织裂解
1. 裂解液制备：每1ml冷的裂解液加入4ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100mg组织样本剪碎，加入1ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆吸入另一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡15-20分钟。
4. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
6. 上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
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