bestbio@163.com
服务热线：021-33921235
登录
说明书下载
产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 蛋白裂解液采用优质原料配制，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用，是经典常用的细组织快速裂解液。 本蛋白裂解液适用于从各种动物实体组织，如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织样品中提取总蛋白。 本蛋白裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本裂解液提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。 裂解液中已含常用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂混合物。 本裂解液中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本裂解液提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒（相关产品BB-3181）。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品BB-38113）。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
1年
检测方法
WB、IP等
适用样本
细胞、组织
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB、IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒 7.匀浆机/匀浆器
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒 7.匀浆机/匀浆器
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
离心管
吸头
一次性手套
吸头
一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。
5.注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂。
5.注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
使用方法
A． 细胞裂解
1. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每5×106个细胞中加入500ul冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
4. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
B． 组织裂解
1. 裂解液制备：每1ml冷的蛋白裂解液加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100mg组织样本剪碎，加入1ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆在4℃振荡15-25分钟。
4. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
1. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每5×106个细胞中加入500ul冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
4. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
B． 组织裂解
1. 裂解液制备：每1ml冷的蛋白裂解液加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100mg组织样本剪碎，加入1ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆在4℃振荡15-25分钟。
4. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
参考文献
1.Fei Ye, Ting Zhao, et al.
Long-term Autophagy and Nrf2 Signaling in the Hippocampi of Developing Mice after Carbon Ion Exposure
Sci Rep. 2015 （IF=5.228）
2.An S.J. Liu P. Shao T.M. et al.
Characterization and Functions of Vascular Adventitial Fibroblast Subpopulations
Cell Physiol Biochem 2015 （IF=4.652）
3.Lu, Zongliang; Zhou, Rui; Kong, Ya, et al.
S-equol, a Secondary Metabolite of Natural Anticancer Isoflavone Daidzein, Inhibits Prostate Cancer Growth In Vitro and In Vivo, Though Activating the Akt/FOXO3a Pathway
Current Cancer Drug Targets 2016 （IF=3.707）
4.Pin Huan, Hongxia Wang et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics 2012 （IF=5.074）
Long-term Autophagy and Nrf2 Signaling in the Hippocampi of Developing Mice after Carbon Ion Exposure
Sci Rep. 2015 （IF=5.228）
2.An S.J. Liu P. Shao T.M. et al.
Characterization and Functions of Vascular Adventitial Fibroblast Subpopulations
Cell Physiol Biochem 2015 （IF=4.652）
3.Lu, Zongliang; Zhou, Rui; Kong, Ya, et al.
S-equol, a Secondary Metabolite of Natural Anticancer Isoflavone Daidzein, Inhibits Prostate Cancer Growth In Vitro and In Vivo, Though Activating the Akt/FOXO3a Pathway
Current Cancer Drug Targets 2016 （IF=3.707）
4.Pin Huan, Hongxia Wang et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics 2012 （IF=5.074）
大包装和定制包装服务
-
优惠促销Promotion
-
轻松下单Order
-
在线留言Online message
-
帮助中心Help center