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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 无去垢剂细胞裂解液采用优质原料配制，对动物细胞胞膜、胞浆、胞核成分均有较强裂解作用。 裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等下游实验。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。可以提供针对不同下游实验应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。 贝博® BBproExtra® 还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
1年
检测方法
WB、IP等
适用样本
细胞
产品应用
WB、IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒 7.匀浆机/匀浆器
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒 7.匀浆机/匀浆器
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
离心管
吸头
一次性手套
吸头
一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
5.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
6.下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
5.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
6.下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
使用方法
A． 细胞裂解
1. 裂解液制备：
每1ml冷的细胞裂解液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106个细胞中加入500ul冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5. 在4℃，12000-14000g条件下离心15分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
B． 组织裂解
1. 裂解液制备：
每1ml冷的裂解液加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100mg组织样本用手术剪刀剪碎，加入1ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆液在4℃振荡15-25分钟。
4. 在4℃，12000-14000g条件下离心15分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
1. 裂解液制备：
每1ml冷的细胞裂解液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106个细胞中加入500ul冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。
5. 在4℃，12000-14000g条件下离心15分钟。
6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
B． 组织裂解
1. 裂解液制备：
每1ml冷的裂解液加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100mg组织样本用手术剪刀剪碎，加入1ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆液在4℃振荡15-25分钟。
4. 在4℃，12000-14000g条件下离心15分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。
上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。
常见问题分析
1.细胞裂解速度慢？
为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
2.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
为了充分保证提取得到的蛋白的活性，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
2.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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