细菌裂解液（免超声）

BB-32081
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产品概述 product description

贝博® BBproExtra® 细菌裂解液采用优质原料配制，用于细菌菌体的裂解，用于细菌蛋白提取，裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western等下游实验。 本裂解液提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本裂解液提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本裂解液中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本裂解液提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒（相关产品BB-3181）。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品BB-38113）。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！

有效期
1年
检测方法
WB、IP等
适用样本
细菌
产品应用
WB、IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
 离心管
 吸头
 一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
5.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法
1. 裂解液的准备：
根据所需要提取的样本量，每500ul裂解液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2. 在4℃， 10000g条件下将菌液离心5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体.
3. 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4. 按每50-100mg湿重菌体样本加入500ul裂解液，吹打混匀，置摇床室温振荡30-45分钟。
5. 在4℃， 10000g条件下将裂解液离心5分钟，将上清移入干净离心管。
6. 即得到细菌蛋白样品。
7. 将细菌总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？ 处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。 2.用什么方法定量蛋白？ 建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。 3.提取的蛋白具有活性吗？ 本试剂盒得到的是变性蛋白。

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