2-8℃

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 蛋白酶抑制剂离心至管底部再开盖。 试剂拆封后请尽快使用完！

一年

WB,IP等

细胞、组织

1. 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2. 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5. 总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

1.离心机2.振荡器3.匀浆机/匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒

1.PBS缓冲液 2.蛋白定量

1.离心管2.吸头3.一次性手套

 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。

A． 细胞裂解1. 裂解液制备：每1ml冷的磷酸化蛋白裂解液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。【注】： 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。2. 取5-10×106个细胞，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。4. 每5×106个细胞中加入500 μl冷的裂解液，混匀后，在4℃条件下振荡15-20分钟。【注】： 每106个细胞，大约10mg或10 μl细胞沉淀体积，加100 μl 磷酸化蛋白裂解液。大约相当于6孔板的每孔加入100 μl~150 μl，或一个75 cm2培养瓶加1 ml。裂解液和细胞应充分接触。如果磷酸化蛋白裂解液不足量，细胞裂解效率将会降低。 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。5. 在4℃，12000-14000×g条件下离心10分钟。6. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。B． 组织裂解1. 裂解液制备：每1ml冷的磷酸化蛋白裂解液加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。【注】： 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶、磷酸酶活性等下游实验时，注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。2. 取100mg组织样本剪碎，加入1ml裂解液，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。3. 将组织匀浆在4℃振荡15-25分钟。【注】： 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。4. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，用于下游实验。上述蛋白提取物可分装后于-80℃冰箱保存备用。【注】： 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：BB-3401。 蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。 总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

1.An S.J., et al.
Characterization and Functions of Vascular Adventitial Fibroblast SubpopulationsCell Physiol Biochem 2015 （IF=5.5）

2.Fei Ye, Ting Zhao, et al.
Long-term Autophagy and Nrf2 Signaling in the Hippocampi of Developing Mice after Carbon Ion ExposureSci Rep. 2015 （IF=5.228）

3.An S.J. Liu P. Shao T.M. et al.
Characterization and Functions of Vascular Adventitial Fibroblast SubpopulationsCell Physiol Biochem 2015 （IF=4.652）

4.Lu, Zongliang; Zhou, Rui; Kong, Ya, et al.
S-equol, a Secondary Metabolite of Natural Anticancer Isoflavone Daidzein, Inhibits Prostate Cancer Growth In Vitro and In Vivo, Though Activating the Akt/FOXO3a PathwayCurrent Cancer Drug Targets 2016 （IF=3.707）

5.Pin Huan, Hongxia Wang et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigasJournal of Proteomics 2012 （IF=5.074）