bestbio@163.com
服务热线：021-33921235
登录
说明书下载
产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 质膜蛋白提取试剂盒是一种快速高效的高产质膜蛋白提取试剂盒。本试剂盒提供全套试剂，适用于从各种原代或传代细胞中提取质膜蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞质膜组份，本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。
本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！
2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
蛋白质组学
适用样本
动物细胞
仪器准备
1. 离心机
2. 振荡器
3. 涡旋混匀器
4. 移液器
5. 冰箱
6. 冰盒
2. 振荡器
3. 涡旋混匀器
4. 移液器
5. 冰箱
6. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
2. 吸头
3. 一次性手套
使用注意事项
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液制备：
将试剂E1和试剂E2混合，配成蛋白提取液E，充分混匀备用。
每500 μl蛋白提取液E中分别加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，800×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 在细胞中加入500 -1000 μl冷的提取液A，充分混匀后，在4℃条件下静置30-60分钟，中途每隔10分钟用移液器轻轻吹打混匀。
5. 在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟。将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
6. 上清在4℃，20000×g条件下离心30分钟。弃上清，留沉淀。
7. 在沉淀中加入400 μl冷的洗涤液D，充分混匀。
8. 在4℃，20000×g条件下离心30分钟。弃上清，留沉淀。
9. 在沉淀中加入200 μl提取液E，充分混匀。
10. 在4℃条件下振荡30-40分钟。
11. 在4℃，10000×g条件下离心10分钟。
12. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到细胞质膜蛋白。
13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或用于下游实验。
14. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
将试剂E1和试剂E2混合，配成蛋白提取液E，充分混匀备用。
每500 μl蛋白提取液E中分别加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，800×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 在细胞中加入500 -1000 μl冷的提取液A，充分混匀后，在4℃条件下静置30-60分钟，中途每隔10分钟用移液器轻轻吹打混匀。
5. 在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟。将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
6. 上清在4℃，20000×g条件下离心30分钟。弃上清，留沉淀。
7. 在沉淀中加入400 μl冷的洗涤液D，充分混匀。
8. 在4℃，20000×g条件下离心30分钟。弃上清，留沉淀。
9. 在沉淀中加入200 μl提取液E，充分混匀。
10. 在4℃条件下振荡30-40分钟。
11. 在4℃，10000×g条件下离心10分钟。
12. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到细胞质膜蛋白。
13. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或用于下游实验。
14. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
常见问题分析
1. 蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2. 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法，或者Bradford法。
3. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2. 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法，或者Bradford法。
3. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1. RuhanJiang et al.
A study on the degradation efficiency of fluoranthene and the transmembrane protein mechanism of Rhodococcus sp. BAP-1 based on iTRAQ
Science of The Total Environment 2020 （IF=10.753）
2. Yihao Zhang et al.
ASIC1a mediates the drug resistance of human hepatocellular carcinoma via the Ca2+/PI3-kinase/AKT signaling pathway
Laboratory Investigation 2017 （IF=5.662）
3. Cuilian Yu et al.
Taishan Pinus massoniana pollen polysaccharide inhibits subgroup J avian leucosis virus infection by directly blocking virus infection and improving immunity
Scientific Reports 2017 （IF=5.228）
4. Xiaoyun Lin et al.
Chimerically fused antigen rich of overlapped epitopes from latent membrane protein 2 (LMP2) of Epstein–Barr virus as a potential vaccine and diagnostic agent
Cellular & Molecular Immunology 2016 （IF=22.096）
5. Zhaolin Chen et al.
Efficiency of transcellular transport and efflux of flavonoids with different glycosidic units from flavonoids of Litsea coreana L. in a MDCK epithelial cell monolayer model
European Journal of Pharmaceutical Sciences 2014 （IF=5.112）
6. Tian Dai et al.
Preparation and drug release mechanism of CTS-TAX-NP-MSCs drug delivery system
International Journal of Pharmaceutics 2013 （IF=6.510）
A study on the degradation efficiency of fluoranthene and the transmembrane protein mechanism of Rhodococcus sp. BAP-1 based on iTRAQ
Science of The Total Environment 2020 （IF=10.753）
2. Yihao Zhang et al.
ASIC1a mediates the drug resistance of human hepatocellular carcinoma via the Ca2+/PI3-kinase/AKT signaling pathway
Laboratory Investigation 2017 （IF=5.662）
3. Cuilian Yu et al.
Taishan Pinus massoniana pollen polysaccharide inhibits subgroup J avian leucosis virus infection by directly blocking virus infection and improving immunity
Scientific Reports 2017 （IF=5.228）
4. Xiaoyun Lin et al.
Chimerically fused antigen rich of overlapped epitopes from latent membrane protein 2 (LMP2) of Epstein–Barr virus as a potential vaccine and diagnostic agent
Cellular & Molecular Immunology 2016 （IF=22.096）
5. Zhaolin Chen et al.
Efficiency of transcellular transport and efflux of flavonoids with different glycosidic units from flavonoids of Litsea coreana L. in a MDCK epithelial cell monolayer model
European Journal of Pharmaceutical Sciences 2014 （IF=5.112）
6. Tian Dai et al.
Preparation and drug release mechanism of CTS-TAX-NP-MSCs drug delivery system
International Journal of Pharmaceutics 2013 （IF=6.510）
-
优惠促销Promotion
-
轻松下单Order
-
在线留言Online message
-
帮助中心Help center