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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 革兰氏阳性细菌表面蛋白提取试剂盒（蛋白质组学实验适用）适用于从从各种革兰氏阳性细菌中高效而温和地抽提细胞壁及其表面的可溶性蛋白。提取过程简单方便。
本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份，不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份，最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响，基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。
本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF，可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移，因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析，蛋白质组学(proteomics)等相关研究。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白也可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定、质谱等下游蛋白研究实验。
保存温度
2-8℃
注意事项
1. 蛋白提取液A2、蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2. 避免反复冻融。
3. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4. 试剂拆封后请尽快使用完！
2. 避免反复冻融。
3. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
4. 试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
蛋白质组学
适用样本
革兰氏阴性菌
产品特点
1. 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2. 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2. 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
仪器准备
1. 离心机
2. 振荡器
3. 超声破碎仪
4. 涡旋混匀器
5. 移液器
6. 冰箱
7. 冰盒
2. 振荡器
3. 超声破碎仪
4. 涡旋混匀器
5. 移液器
6. 冰箱
7. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
2. 蛋白定量试剂盒
2. 蛋白定量试剂盒
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
2. 吸头
3. 一次性手套
使用注意事项
1. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5. 离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
2. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3. 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4. 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5. 离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
使用方法
1. 提取液制备：
将试剂A1和试剂A2混合，配成蛋白提取液A，充分混匀备用。
每500 μl蛋白提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 在4℃， 10000×g条件下将菌液离心5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3. 用PBS洗菌体一次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4. 按每50-200 mg湿重菌体样本加入500 μl蛋白提取液，吹打混匀，2-8℃振荡15-30分钟。
5. 在4℃， 12000×g条件下将提取液离心10分钟，将上清移入冷的干净离心管。即得到细菌壁表面蛋白样品。
6. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
将试剂A1和试剂A2混合，配成蛋白提取液A，充分混匀备用。
每500 μl蛋白提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 在4℃， 10000×g条件下将菌液离心5min，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3. 用PBS洗菌体一次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4. 按每50-200 mg湿重菌体样本加入500 μl蛋白提取液，吹打混匀，2-8℃振荡15-30分钟。
5. 在4℃， 12000×g条件下将提取液离心10分钟，将上清移入冷的干净离心管。即得到细菌壁表面蛋白样品。
6. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1. 蛋白浓度低？
细胞壁表面蛋白丰度较低，需要足够的细胞量才可能得到足够的蛋白量，在条件允许的情况下，尽可能加大细胞的上样量。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2. 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
细胞壁表面蛋白丰度较低，需要足够的细胞量才可能得到足够的蛋白量，在条件允许的情况下，尽可能加大细胞的上样量。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2. 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1. HaiFeng Su et al.
An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash
Chemical Engineering Journal 2020 （IF=8.355）
2. HF Su et al.
A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool
Fuel 2020 （IF=5.128）
3. H Shi et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）
4. Gang Zhou et al.
Proteome responses of Citrobacter werkmanii BF-6 planktonic cells and biofilms to calcium chloride
Journal of Proteomics 2016 （IF=3.914）
An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash
Chemical Engineering Journal 2020 （IF=8.355）
2. HF Su et al.
A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool
Fuel 2020 （IF=5.128）
3. H Shi et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）
4. Gang Zhou et al.
Proteome responses of Citrobacter werkmanii BF-6 planktonic cells and biofilms to calcium chloride
Journal of Proteomics 2016 （IF=3.914）
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