线粒体蛋白提取试剂盒(蛋白组实验、质谱适用)

BB-319921
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  • 100T
价格
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产品概述 product description

贝博® BBproExtra® 线粒体蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织中提取线粒体蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒的蛋白提取组份中不含有不可透析除去的去垢剂组份,不含SDS、Triton X-100、chaps等可能影响质谱实验的组份,最后得到的蛋白质样品经过透析或者脱盐处理后将不含有去垢剂、高浓度盐等影响,基本可以满足下游任意的蛋白质组学相关实验研究。 本产品的蛋白酶抑制剂混合物中不含AEBSF,可以避免由于AEBSF导致的质谱峰漂移,因此使用本产品提取的蛋白样品可以用于质谱(Mass Spectrometry, MS)检测和分析,蛋白质组学(proteomics)等相关研究。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白也可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。 3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
质谱分析
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
 使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。 将蛋白提取的时间缩短至1小时。 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
质谱分析
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.匀浆机/匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.蛋白定量
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 2.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。 4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。 5.最好使用Dounce匀浆器匀浆,如果没有Dounce匀浆器,用普通国产0.5ml或1ml玻璃匀浆器匀浆也可,但是线粒体回收率会下降。 6.组织样品每50-100 mg用剪刀尽可能剪碎后按下面步骤操作。
使用方法
1. 提取液准备:将试剂C1和试剂C2混合,配成蛋白提取液C,充分混匀备用。每500 μl蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。【注】: 蛋白提取液A置4℃保存,长期不用的可以分装后-20℃保存。 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。2. 取2×107个细胞,在4℃,500×g条件下离心5分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干,收集细胞。【注】: 由于线粒体蛋白含量较少,需要较多的细胞才能保证得率。3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。【注】: PBS重悬细胞,1000×g离心5分钟。4. 在细胞沉淀中加入500 μl冷的试剂 A,置冰上5分钟。5. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。【注】: 先用Dounce匀浆器的松型槌初步匀浆10-20次,再用紧型槌匀浆20-30次。 每上下一个来回为一次。6. 在4℃,500×g条件下离心5分钟。弃沉淀,将上清吸入另一预冷的干净离心管。7. 将上清在4℃,1000×g条件下离心10分钟。弃沉淀,收集上清。8. 将上清在4℃,10000×g条件下离心20分钟。弃上清,收集沉淀。9. 在沉淀中加入200μl冷的试剂B,充分混匀。10. 在4℃,10000×g条件下离心20分钟。弃上清,收集沉淀。11. 在沉淀中加入80 μl-150 μl蛋白提取液C,充分混匀。置4℃振荡20-40分钟。【注】: 使用振荡器/摇床的较低转速,提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡,稍微延长提取液的处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。12. 在4℃,10000×g条件下离心10分钟。13. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得线粒体蛋白。14. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。【注】: 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品:BB-3401。 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。15. 将蛋白样品透析处理或者脱盐柱脱盐处理后用于下游实验。【注】: 蛋白样品中含有盐,需要脱盐处理后用于双向电泳。 经透析或脱盐离心柱处理的蛋白样品不含有去垢剂和高浓度盐。
常见问题分析
1.蛋白浓度低? 处理部分线粒体样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。需要足够的细胞或组织样品的上样量。 2.用什么方法定量蛋白?建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。 3.提取的蛋白具有活性吗?本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.Xiao Jiang et al. Overexpression of augmenter of liver regeneration (ALR) mitigates the effect of H2O2-induced endoplasmic reticulum stress in renal tubule epithelial cellsApoptosis 2019  2.Tao Li et al. Polydatin mediates Parkin-dependent mitophagy and protects against mitochondria-dependent apoptosis in acute respiratory distress syndromeLaboratory Investigation 2019  Jie Ouyang et al.SIRT3 Inactivation Promotes Acute Kidney Injury Through Elevated Acetylation of SOD2 and p53Journal of Surgical Research 2019  Zhenhua Zeng et al.Polydatin Protecting Kidneys against Hemorrhagic Shock-Induced Mitochondrial Dysfunction via SIRT1 Activation and p53 DeacetylationOxidative Medicine and Cellular Longevity 2016  Wei Xiong et al.Moderate hypothermia ameliorates enterocyte mitochondrial dysfunction in severe shock and reperfusionJournal of Surgical Research 2016

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