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产品概述
product description
贝博TM BBproExtraTM植物蛋白提取试剂盒（无去垢剂组份）提供全套试剂，适用于从各种植物细胞、组织样本中提取总蛋白。提取过程简单方便。 本试剂盒的所有组份均不含去垢剂成分，最后得到的蛋白样品的成分对NI柱纯化、分子筛、离子交换、亲和纯化等下游应用没有明显影响。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
无去垢剂
适用样本
植物
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
无去垢剂
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
植物组织样本：
1、 提取液准备：
每500ul冷的提取液A中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2、 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的100-200mg鲜嫩植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3、 将匀浆液吸入一个预冷的干净离心管中在4℃振荡30分钟-1小时。
4、 在4℃，12000g条件下离心10-15分钟。
5、 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到植物总蛋白。
6、 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
细胞样本：
1、 提取液准备：
每500ul冷的提取液A中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2、 细胞用PBS洗涤2次。
3、 加入细胞体积5-10倍体积的蛋白提取液，振荡1小时。
4、 在4℃，12000g条件下离心10-15分钟。
5、 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
6、 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
冻存样本：
1、 冻存组织样本参照上述组织样本步骤操作。
2、 冻存细胞样本中直接加入5-10倍体积的蛋白提取液，振荡30分钟。
3、 在4℃，12000g条件下离心15分钟。
4、 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
5、 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
1、 提取液准备：
每500ul冷的提取液A中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2、 取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的100-200mg鲜嫩植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入500ul提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3、 将匀浆液吸入一个预冷的干净离心管中在4℃振荡30分钟-1小时。
4、 在4℃，12000g条件下离心10-15分钟。
5、 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到植物总蛋白。
6、 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
细胞样本：
1、 提取液准备：
每500ul冷的提取液A中加入4ul蛋白稳定剂和2ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2、 细胞用PBS洗涤2次。
3、 加入细胞体积5-10倍体积的蛋白提取液，振荡1小时。
4、 在4℃，12000g条件下离心10-15分钟。
5、 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
6、 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
冻存样本：
1、 冻存组织样本参照上述组织样本步骤操作。
2、 冻存细胞样本中直接加入5-10倍体积的蛋白提取液，振荡30分钟。
3、 在4℃，12000g条件下离心15分钟。
4、 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到总蛋白。
5、 上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的核蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。
4.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的核蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。
4.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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