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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 胞浆蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从细胞和动物组织制备胞浆蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。制备的胞浆蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒的所有组份均不含去垢剂成分，最后得到的蛋白样品的成分对NI柱纯化、分子筛、离子交换、亲和纯化等下游应用没有去垢剂影响。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广，提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
无去垢剂
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
无去垢剂
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
细胞蛋白提取
1. 提取液制备：
每500ul冷的胞浆蛋白提取液A加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂，充分混匀。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500g力条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每20ul细胞沉淀体积（约20mg，2×106个细胞）中加入100-200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡混匀或吹打混匀，置2-8℃条件振荡20-30分钟。
5. 然后在4℃，16000g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织蛋白提取
1. 提取液制备：
每500ul冷的胞浆蛋白提取液A加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂，充分混匀。
2. 取适量组织样本用剪刀剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 匀浆液在4℃，500g力条件下离心5分钟，弃上清。
4. 每20ul细胞沉淀体积（约20mg）中加入200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件振荡20-30分钟。
5. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000g力条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
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1. 提取液制备：
每500ul冷的胞浆蛋白提取液A加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂，充分混匀。
2. 取5-10×106个细胞，在4℃，500g力条件下离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每20ul细胞沉淀体积（约20mg，2×106个细胞）中加入100-200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡混匀或吹打混匀，置2-8℃条件振荡20-30分钟。
5. 然后在4℃，16000g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
组织蛋白提取
1. 提取液制备：
每500ul冷的胞浆蛋白提取液A加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和2ul磷酸酶抑制剂，充分混匀。
2. 取适量组织样本用剪刀剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 匀浆液在4℃，500g力条件下离心5分钟，弃上清。
4. 每20ul细胞沉淀体积（约20mg）中加入200μl冷的提取液 A，高速涡旋振荡15秒或吹打混匀，置2-8℃条件振荡20-30分钟。
5. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000g力条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白。
7. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
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参考文献
1.Zhiyuan Tang, Mengqiu Wu, Yingchun Li, et al.
Absolute quantification of NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1 in human tumor cell lines and tissues by liquid chromatography–mass spectrometry/mass spectrometry using both isotopic and non-isotopic internal standards
Analytica Chimica Acta 2013 （IF=4.387）
2.Jinchun Qian, Fengrong Jiang, Bin Wang et al.
Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells
Journal of Ethnopharmacology 2010 （IF=3.014）
Absolute quantification of NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1 in human tumor cell lines and tissues by liquid chromatography–mass spectrometry/mass spectrometry using both isotopic and non-isotopic internal standards
Analytica Chimica Acta 2013 （IF=4.387）
2.Jinchun Qian, Fengrong Jiang, Bin Wang et al.
Ophiopogonin D prevents H2O2-induced injury in primary human umbilical vein endothelial cells
Journal of Ethnopharmacology 2010 （IF=3.014）
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