细菌蛋白快速提取试剂盒(离心柱法)

BB-319614
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  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥700元
  • ¥1200元
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产品概述 product description

贝博® BBproExtra® 细菌蛋白提取试剂盒(离心管法)提供全套试剂,适用于从从各种菌体中提取总蛋白,包括革兰氏阳性和革兰氏阴性细菌,可用于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。提取过程简单方便。 本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 试剂盒所配离心管用来有效去除非蛋白质类杂质,并非采用离心管吸附蛋白质。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用贝博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳,用脱盐管脱盐处理(相关产品BB-38113)。 贝贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。 3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
离心柱
适用样本
细菌
产品特点
 使用方便:不需昂贵设备。 可以处理各种细菌菌体,包括新鲜菌液和冰冻菌体。 将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。 采用温和的中性裂解组分,保持蛋白活性。 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。 本试剂盒中不有EDTA,与金属螯和层析等兼容。
产品应用
离心柱
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.匀浆机/匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.蛋白定量
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 2.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。 4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液制备:根据所需要提取的样本量,每500 μl提取液A中加入5 μl蛋白提取液B和2 μl蛋白酶抑制剂混合物,充分混匀后置冰上备用。【注】: 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 蛋白样品用于测定某些细胞内蛋白酶活性等下游实验时,注意根据实际情况调整抑制剂混合物是否加入。 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。2. 在4℃, 10000×g条件下将菌液离心5 min,弃上清,尽量吸干剩余液体,收集菌体。3. 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。4. 按每50-100 mg湿重菌体样本加入500 μl提取液,吹打混匀,2-8℃振荡20-30分钟。【注】: 使用振荡器/摇床的较低转速,提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡,稍微延长提取液的处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。5. 在150 w-300 w,10 s超声/10 s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。【注】: 此步可以选做,没有超声条件的话可以不超声,延长上步骤振荡时间即可,至菌体充分裂解。 超声时间尽量短,提取液变清即可,一般不超过20分钟。 如果超声时出现黑色沉淀,说明超声功率过大,需要降低功率。 避免产生泡沫。6. 套上液体收集管,将提取液吸入蛋白离心管内管中,在4℃,8000×g条件下离心5分钟。【注】: 离心前蛋白液会在重力作用下自然流穿离心管,一定要先套上收集管再吸入蛋白液。7. 收集套管内液体即得到细菌总蛋白。8. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。【注】: 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品:BB-3401。 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
常见问题分析
1.蛋白浓度低? 处理部分样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。部分革兰氏阳性菌可能较难裂解,最好进行超声处理。 2.用什么方法定量蛋白? 建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐管改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。 3.提取时出现胶状沉淀? 蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下,可以直接离心取上清进行后续实验即可;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理,300w/10秒间隔10秒,超声3分钟,随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,不必进行超声处理。 4.提取的蛋白具有活性吗? 本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.HaiFeng Su et al. An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ashChemical Engineering Journal 2020 (IF=13.273) HF Su et al. A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal poolFuel 2020 (IF=6.609)  H Shi et al. Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 compositeApplied Catalysis B: Environmental 2019 (IF=19.503)

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