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产品概述
product description
跨膜蛋白承担各种生物功能，膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和表面活性剂增溶。去污剂处理会使膜蛋白丧失其天然结构，因而妨碍了膜蛋白的功能研究。 贝博TM BBproExtraTM酵母膜蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。酵母膜蛋白提取试剂盒可以从各种酵母样本中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解酵母总膜组份，包括质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白样本不含有盐成分，可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验，请使用贝博其他货号的试剂盒。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
双向电泳
适用样本
酵母
产品特点
1、 使用方便。
2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
双向电泳
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1、 提取液制备：
每500ul酵母蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2、 取适量酵母培养物，在4℃，2500g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3、 用冷PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4、 每100-200ul体积酵母沉淀物中加入500ul酵母蛋白提取液A，混匀后，在室温或37℃条件下轻轻振荡1-2小时。
5、 在4℃，3000g条件下离心5-10分钟，移除上清，收集沉淀。
6、 在沉淀物中加入500ul冷的（4℃）酵母蛋白提取液B，混匀。
7、 在2-8℃条件下轻轻振荡30-45分钟。
8、 将提取液在4℃条件下10000×g离心5分钟，取上清。
9、 将上清在37℃水浴10分钟。
10、 在37℃ 1000×g离心3分钟。
11、 此时溶液分为2层，小心移除上层部分，留下管底部下层部分大约30-50ul液体。
12、 用50-100ul膜蛋白溶解液溶解该下层溶液，即得酵母膜蛋白样品。
13、 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
每500ul酵母蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2、 取适量酵母培养物，在4℃，2500g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3、 用冷PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4、 每100-200ul体积酵母沉淀物中加入500ul酵母蛋白提取液A，混匀后，在室温或37℃条件下轻轻振荡1-2小时。
5、 在4℃，3000g条件下离心5-10分钟，移除上清，收集沉淀。
6、 在沉淀物中加入500ul冷的（4℃）酵母蛋白提取液B，混匀。
7、 在2-8℃条件下轻轻振荡30-45分钟。
8、 将提取液在4℃条件下10000×g离心5分钟，取上清。
9、 将上清在37℃水浴10分钟。
10、 在37℃ 1000×g离心3分钟。
11、 此时溶液分为2层，小心移除上层部分，留下管底部下层部分大约30-50ul液体。
12、 用50-100ul膜蛋白溶解液溶解该下层溶液，即得酵母膜蛋白样品。
13、 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
膜蛋白丰度较低，需要加大细胞上样量。处理部分细胞样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。各步骤处理时温度必须按照说明书要求的温度进行。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
膜蛋白丰度较低，需要加大细胞上样量。处理部分细胞样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。各步骤处理时温度必须按照说明书要求的温度进行。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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