bestbio@163.com
服务热线：021-33921235
登录
说明书下载
产品概述
product description
贝博TM BBproExtra® 膜蛋白提取试剂盒（双向电泳用）是一种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒。 膜蛋白提取试剂盒可以从细胞组织样本中提取膜蛋白，可用于纯化膜蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。 提取的蛋白样品中不含盐，可以直接用于等电聚焦、双向电泳等。如下游实验不需要直接用于等电聚焦、双向电泳，可选用 贝博用于Western Blotting、普通蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验的其他试剂盒（相关产品BB-3103）。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
双向电泳
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1、 使用方便。
2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
双向电泳
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液制备：
每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500g条件下离心3-5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
或者取50mg-100mg组织样本，用冷PBS洗干净，然后用手术剪刀尽可能剪碎，加400ul冷的试剂 A，用组织匀浆机/器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 洗涤后的细胞样品中加入400ul冷的试剂 A，充分混匀。
4. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，细胞沉淀明显减少。
5. 在2-8℃低温下12000g离心5分钟，取上清。
6. 在37℃水浴10分钟。
7. 在37℃， 1000g离心3分钟。
8. 此时液体分为2层，小心移除上层溶液，留管底部下层，大约50ul液体。
9. 用50ul-200ul膜蛋白溶解液溶解该下层液体，即得膜蛋白样品。
10. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500g条件下离心3-5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
或者取50mg-100mg组织样本，用冷PBS洗干净，然后用手术剪刀尽可能剪碎，加400ul冷的试剂 A，用组织匀浆机/器匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 洗涤后的细胞样品中加入400ul冷的试剂 A，充分混匀。
4. 在2-8℃条件下振荡20-30分钟，至细胞充分裂解，细胞沉淀明显减少。
5. 在2-8℃低温下12000g离心5分钟，取上清。
6. 在37℃水浴10分钟。
7. 在37℃， 1000g离心3分钟。
8. 此时液体分为2层，小心移除上层溶液，留管底部下层，大约50ul液体。
9. 用50ul-200ul膜蛋白溶解液溶解该下层液体，即得膜蛋白样品。
10. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
膜蛋白丰度较低，需要尽可能加大细胞上样量。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
膜蛋白丰度较低，需要尽可能加大细胞上样量。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
大包装和定制包装服务
-
优惠促销Promotion
-
轻松下单Order
-
在线留言Online message
-
帮助中心Help center