植物种子蛋白提取试剂盒（2D电泳用）

BB-31832
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产品概述 product description

贝博TM BBproExtraTM植物种子蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种高淀粉含量的植物种子样品中提取可溶性蛋白。如水稻、荞麦、玉米、小麦等。提取过程简单方便。 本试剂盒提取的蛋白样本不含有高浓度的盐成分，可直接用于等电聚焦、双向电泳，如下游实验需要直接用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验，请使用贝博其他货号的试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
双向电泳
适用样本
植物种子
产品应用
双向电泳
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法
1. 将适量待提取种子样本剥皮，用PBS或纯水洗涤3次。
2. 将样本置研钵液氮充分研磨。
3. 加入500ul蛋白提取液A充分混匀。移入离心管。
4. 将离心管置振荡器轻轻振荡30分钟-60分钟。
5. 在4℃，15000g离心20分钟。
6. 收集上清，弃沉淀。
7. 取5ml离心管，加入500ul离心上清，再加入2ml试剂B，500ul试剂C，1.5ml试剂D，涡旋20秒充分混匀。
8. 冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。
9. 在4℃，11000g条件下离心15分钟。
10. 小心移除上层清液丢弃，收集中下层含蛋白层。
11. 在4℃，15000g以上条件下离心20分钟。
12. 弃上清，收集沉淀。
13. 用50－200ul试剂E充分溶解蛋白沉淀。
14. 在4℃，12000g条件下离心20分钟。
15. 收集上清用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
部分植物种子蛋白丰度极低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大种子样本的上样量。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂E中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

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