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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 细菌总蛋白提取试剂盒（双向电泳用）可以从各种细菌样本中提取总蛋白，提取过程简单方便。 本试剂盒适用于各种革兰氏阳性菌和阴性菌样本。 该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白不含盐，可直接用于2D电泳。 如下游实验不需要直接用于等电聚焦、双向电泳等，可选用用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验的试剂盒（相关产品BB-3123）。 贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
细菌
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液的准备：
根据所需要提取的样本量，每500 μl蛋白提取液中A加入5 μl试剂B和2 μl蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀。
2. 在 12000×g条件下将菌液离心5分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3. 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4. 按每100 mg湿重菌体样本加入500 μl裂解液，吹打混匀，2-8℃振荡20-30分钟。
5. 在150 w-300 w，10 s超声/10 s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。
6. 在4℃， 12000×g条件下将菌液离心5分钟，将上清移入冷的干净离心管。
7. 即得到细菌总蛋白样品。
8. 将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。
根据所需要提取的样本量，每500 μl蛋白提取液中A加入5 μl试剂B和2 μl蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀。
2. 在 12000×g条件下将菌液离心5分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3. 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4. 按每100 mg湿重菌体样本加入500 μl裂解液，吹打混匀，2-8℃振荡20-30分钟。
5. 在150 w-300 w，10 s超声/10 s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。
6. 在4℃， 12000×g条件下将菌液离心5分钟，将上清移入冷的干净离心管。
7. 即得到细菌总蛋白样品。
8. 将总蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。部分革兰氏阳性菌可能较难裂解，最好进行超声处理。
2.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。部分革兰氏阳性菌可能较难裂解，最好进行超声处理。
2.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
参考文献
1.Gang Zhou et al.
Proteome responses of Citrobacter werkmanii BF-6 planktonic cells and biofilms to calcium chloride
Journal of Proteomics 2016 （IF=4.044）
2.H Shi et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）
3.HaiFeng Su et al.
An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash
Chemical Engineering Journal 2020 （IF=8.355）
4.HF Su et al.
A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool
Fuel 2020 （IF=5.128）
Proteome responses of Citrobacter werkmanii BF-6 planktonic cells and biofilms to calcium chloride
Journal of Proteomics 2016 （IF=4.044）
2.H Shi et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）
3.HaiFeng Su et al.
An integrated approach combines hydrothermal chemical and biological treatment to enhance recycle of rare metals from coal fly ash
Chemical Engineering Journal 2020 （IF=8.355）
4.HF Su et al.
A sequential integration approach using Aspergillus Niger to intensify coal fly ash as a rare metal pool
Fuel 2020 （IF=5.128）
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