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保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
骨组织
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
使用方法
1. 提取液制备：
根据样本数量，按每400 μl冷的骨组织蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂，混匀后置室温备用。
2. 取新鲜骨组织样品，在4℃，用pH7.4的PBS缓冲液或生理盐水中充分浸泡。换新鲜生理盐水/PBS再次充分浸泡，然后用纯水清洗，去除血液，红细胞。
3. 将骨组织剪碎，称重后放入装有液氮的研钵中，将骨组织磨成粉末，保持液氮不能完全挥发。
4. 将骨组织粉末加入离心管中，按每200 mg骨组织加入400 μl蛋白提取液。
5. 混匀后在室温条件下振荡30分钟。
6. 在80-100 w，5 s超声/5 s间隔条件下冰浴超声20次。
7. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
8. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到骨组织总蛋白。
9. 上述蛋白提取物直接用于下游实验或分装后于-80℃冰箱保存备用。
根据样本数量，按每400 μl冷的骨组织蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂，混匀后置室温备用。
2. 取新鲜骨组织样品，在4℃，用pH7.4的PBS缓冲液或生理盐水中充分浸泡。换新鲜生理盐水/PBS再次充分浸泡，然后用纯水清洗，去除血液，红细胞。
3. 将骨组织剪碎，称重后放入装有液氮的研钵中，将骨组织磨成粉末，保持液氮不能完全挥发。
4. 将骨组织粉末加入离心管中，按每200 mg骨组织加入400 μl蛋白提取液。
5. 混匀后在室温条件下振荡30分钟。
6. 在80-100 w，5 s超声/5 s间隔条件下冰浴超声20次。
7. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
8. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到骨组织总蛋白。
9. 上述蛋白提取物直接用于下游实验或分装后于-80℃冰箱保存备用。
常见问题分析
1.提取速度慢？
为了充分保证提取得到的蛋白回收率，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
2.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
3.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
为了充分保证提取得到的蛋白回收率，提取液采用独特的保护蛋白的配方，裂解能力温和，下游应用范围广。适当延长裂解的时间即可。
2.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
3.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
参考文献
1.Liu L. Wang R. Zhu H, et al.
Rehmanniae Radix Preparata suppresses bone loss and increases bone strength through interfering with canonical Wnt/β-catenin signaling pathway in OVX rats
Osteoporosis International 2019
2.Qudong Yin Jian Wang Qiang Fu et al.
CircRUNX2 through has‐miR‐203 regulates RUNX2 to prevent osteoporosis
Journal of Cellular and Molecular Medicine 2018
3.Ma R. Wang L. Zhao B., et al.
Diabetes Perturbs Bone Microarchitecture and Bone Strength through Regulation of Sema3A/IGF-1/β-Catenin in Rats
Cellular Physiology and Biochemistry 2017
4.Pin Huan, Hongxia Wang et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Bone 2014
Rehmanniae Radix Preparata suppresses bone loss and increases bone strength through interfering with canonical Wnt/β-catenin signaling pathway in OVX rats
Osteoporosis International 2019
2.Qudong Yin Jian Wang Qiang Fu et al.
CircRUNX2 through has‐miR‐203 regulates RUNX2 to prevent osteoporosis
Journal of Cellular and Molecular Medicine 2018
3.Ma R. Wang L. Zhao B., et al.
Diabetes Perturbs Bone Microarchitecture and Bone Strength through Regulation of Sema3A/IGF-1/β-Catenin in Rats
Cellular Physiology and Biochemistry 2017
4.Pin Huan, Hongxia Wang et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Bone 2014
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