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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 植物高尔基体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种新鲜植物组织样本中提取高尔基体蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解高尔基体组份，本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、蛋白活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
植物
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是高尔基体回收率会下降。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是高尔基体回收率会下降。
使用方法
1. 提取液准备：
每500ul冷的蛋白提取液C中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取200-500mg新鲜植物叶片组织样本，用PBS洗涤干净。
3. 用手术剪刀尽可能剪碎。
4. 加入1ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器充分匀浆30-40次。
6. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，6000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
9. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心20分钟。
10. 弃上清，在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
11. 在4℃，50000×g力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。
12. 在沉淀中加入100-300ul冷的蛋白提取液C，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟。
13. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
14. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到高尔基体蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
每500ul冷的蛋白提取液C中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取200-500mg新鲜植物叶片组织样本，用PBS洗涤干净。
3. 用手术剪刀尽可能剪碎。
4. 加入1ml冷的试剂 A，置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器充分匀浆30-40次。
6. 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在4℃，3000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
8. 将上清在4℃，6000×g力条件下离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
9. 将上清在4℃，50000×g力条件下离心20分钟。
10. 弃上清，在沉淀中加入500μl冷的试剂B，混匀。
11. 在4℃，50000×g力条件下离心30分钟。弃上清，收集沉淀。
12. 在沉淀中加入100-300ul冷的蛋白提取液C，吹打混匀后，在4℃条件下振荡20-30分钟。
13. 在4℃，12000×g条件下离心15分钟。
14. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到高尔基体蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂C中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂C中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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