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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 类囊体膜蛋白提取试剂盒用简便快速的方法可以从各种植物样本中提取叶绿体类囊体膜蛋白，提取过程简单方便，可在一小时内提取得到高质量的类囊体膜蛋白。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品BB-38113）。
贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。
保存温度
2-8℃
注意事项
1. 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！
2. 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3. 试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
适用样本
植物
产品特点
1. 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2. 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至1小时。
3. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2. 提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至1小时。
3. 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4. 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5. 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
仪器准备
1. 离心机
2. 振荡器
3. 匀浆机/匀浆器
4. 涡旋混匀器
5. 移液器
6. 冰箱
7. 冰盒
2. 振荡器
3. 匀浆机/匀浆器
4. 涡旋混匀器
5. 移液器
6. 冰箱
7. 冰盒
试剂准备
1. PBS缓冲液
2. 蛋白定量试剂盒
2. 蛋白定量试剂盒
耗材准备
1. 离心管
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 100 μm细胞筛
2. 吸头
3. 一次性手套
4. 100 μm细胞筛
使用注意事项
1. 预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。
2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4. 操作时必须按照下面步骤里的温度条件，否则严重影响膜蛋白的回收率。
5. 提取液B在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
6. 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
7. 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
2. 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
3. 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4. 操作时必须按照下面步骤里的温度条件，否则严重影响膜蛋白的回收率。
5. 提取液B在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
6. 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
7. 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
使用方法
1. 提取液制备：
每500 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取500 mg-1 g新鲜植物叶片样本，用纯水洗净擦干后去除叶梗和粗脉，用手术剪刀尽可能剪碎。
3. 加入2 ml提取液A用组织搅碎机/匀浆机/匀浆器充分匀浆。
4. 将匀浆用100 μm细胞筛过滤。
5. 将滤液500×g力离心3分钟。弃沉淀，将上清移入另一干净离心管。
6. 将上清3000×g力离心15分钟。弃上清，收集沉淀。
7. 在沉淀中加入1000 μl蛋白提取液B，充分混匀。 在2-8℃条件下静置30分钟。中途用移液器吹打混匀一次。
8. 在3000×g力离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
9. 将上清在20000×g力离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
10. 在沉淀中加入500 μl膜蛋白提取液C，充分混匀。 在2-8℃条件下振荡1小时。
11. 将提取液在4℃，12000×g条件下离心5分钟，取上清。
12. 在37℃水浴（气浴）10分钟。
13. 在37℃ ，1000×g离心5分钟。
此时溶液分为两层，小心移除上层，保留下层溶液，大约30-50 μl。
14. 用30-100 μl冷的膜蛋白溶解液D溶解下层溶液，即得类囊体膜蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。
每500 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取500 mg-1 g新鲜植物叶片样本，用纯水洗净擦干后去除叶梗和粗脉，用手术剪刀尽可能剪碎。
3. 加入2 ml提取液A用组织搅碎机/匀浆机/匀浆器充分匀浆。
4. 将匀浆用100 μm细胞筛过滤。
5. 将滤液500×g力离心3分钟。弃沉淀，将上清移入另一干净离心管。
6. 将上清3000×g力离心15分钟。弃上清，收集沉淀。
7. 在沉淀中加入1000 μl蛋白提取液B，充分混匀。 在2-8℃条件下静置30分钟。中途用移液器吹打混匀一次。
8. 在3000×g力离心10分钟。弃沉淀，收集上清。
9. 将上清在20000×g力离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
10. 在沉淀中加入500 μl膜蛋白提取液C，充分混匀。 在2-8℃条件下振荡1小时。
11. 将提取液在4℃，12000×g条件下离心5分钟，取上清。
12. 在37℃水浴（气浴）10分钟。
13. 在37℃ ，1000×g离心5分钟。
此时溶液分为两层，小心移除上层，保留下层溶液，大约30-50 μl。
14. 用30-100 μl冷的膜蛋白溶解液D溶解下层溶液，即得类囊体膜蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。
常见问题分析
1. 蛋白浓度低？
膜蛋白丰度比较低，需要足够的植物样品上样量才能提高蛋白浓度。在条件允许的情况下，请尽可能提高上样量。
也可能第7/10步处理时，部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂B/C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
注意第3步处理组织样本要适度，在整个后续的离心过程中不要将叶绿体丢掉了，根据颜色判断即可。
2. 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
4. 膜蛋白电泳没有条带？
膜蛋白样品通常浓度较低，电泳前一定要进行蛋白定量，以保证电泳是蛋白上样量足够。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超声处理一下，再进行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保温30分钟。
蛋白Loading buffer中SDS终浓度含量可以提高至3%-10%。
有些样品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上样缓冲液中，一般可以跑出清晰的蛋白条带。
电泳时最好采用低电压低电流电泳。
膜蛋白丰度通常较低，有条件可以尝试用银染染色。
膜蛋白丰度比较低，需要足够的植物样品上样量才能提高蛋白浓度。在条件允许的情况下，请尽可能提高上样量。
也可能第7/10步处理时，部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂B/C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
注意第3步处理组织样本要适度，在整个后续的离心过程中不要将叶绿体丢掉了，根据颜色判断即可。
2. 用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3. 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
4. 膜蛋白电泳没有条带？
膜蛋白样品通常浓度较低，电泳前一定要进行蛋白定量，以保证电泳是蛋白上样量足够。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超声处理一下，再进行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保温30分钟。
蛋白Loading buffer中SDS终浓度含量可以提高至3%-10%。
有些样品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上样缓冲液中，一般可以跑出清晰的蛋白条带。
电泳时最好采用低电压低电流电泳。
膜蛋白丰度通常较低，有条件可以尝试用银染染色。
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