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产品概述
product description
线粒体(mitochondria)是真核细胞中产生能量的重要细胞器，细胞中的能源物质—脂肪、糖、部分氨基酸在此进行最终的氧化，并通过偶联磷酸化生成ATP，供给细胞生理活动之需。跨膜蛋白承担各种生物功能，在生物的各种发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。 贝博® BBproExtra® 植物线粒体膜蛋白提取试剂盒用简便快速的方法可以从各种植物样本中提取线粒体膜蛋白，提取过程简单方便，可在一小时内提取得到高质量的线粒体膜蛋白。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
植物
产品特点
1.使用方便。
2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
提取液B在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
提取液B在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
使用方法
1. 提取液准备：
每200ul预冷的蛋白溶解液C中加入1ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2. 取新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。2g植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎。
3. 加入4ml提取液A后用匀浆机充分匀浆或者匀浆器充分匀浆。
4. 将匀浆液用100um细胞筛过滤。
5. 将滤液置振荡器轻微振荡20-30分钟。
6. 将滤液700×g 离心10分钟。弃沉淀，取上清。
7. 将上清在2000×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
8. 将上清11000-12000×g离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入300-500ul冰冷的提取液B和1ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后在4℃振荡1小时。
10. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟，取上清。
11. 在37℃水浴10分钟。
12. 在37℃ 800-1000×g离心3分钟。
13. 此时溶液分为两层，小心移除上层，保留下层溶液，大约30-50ul液体。
14. 用50-150μl冷的膜蛋白溶解液稀释下层溶液，即得线粒体膜蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。
每200ul预冷的蛋白溶解液C中加入1ul蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
2. 取新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。2g植物组织样本用手术剪刀尽可能剪碎。
3. 加入4ml提取液A后用匀浆机充分匀浆或者匀浆器充分匀浆。
4. 将匀浆液用100um细胞筛过滤。
5. 将滤液置振荡器轻微振荡20-30分钟。
6. 将滤液700×g 离心10分钟。弃沉淀，取上清。
7. 将上清在2000×g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
8. 将上清11000-12000×g离心20分钟。弃上清，收集沉淀。
9. 在沉淀中加入300-500ul冰冷的提取液B和1ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后在4℃振荡1小时。
10. 在4℃，12000×g条件下离心5分钟，取上清。
11. 在37℃水浴10分钟。
12. 在37℃ 800-1000×g离心3分钟。
13. 此时溶液分为两层，小心移除上层，保留下层溶液，大约30-50ul液体。
14. 用50-150μl冷的膜蛋白溶解液稀释下层溶液，即得线粒体膜蛋白。
15. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂AB的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
4.膜蛋白电泳没有条带？
膜蛋白样品通常浓度较低，电泳前一定要进行蛋白定量，以保证电泳是蛋白上样量足够。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超声处理一下，再进行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保温30分钟。
蛋白Loading buffer中SDS终浓度含量可以提高至3%-10%。
有些样品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上样缓冲液中，一般可以跑出清晰的蛋白条带。
电泳时最后采用低电压低电流电泳。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂AB的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
4.膜蛋白电泳没有条带？
膜蛋白样品通常浓度较低，电泳前一定要进行蛋白定量，以保证电泳是蛋白上样量足够。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超声处理一下，再进行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保温30分钟。
蛋白Loading buffer中SDS终浓度含量可以提高至3%-10%。
有些样品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上样缓冲液中，一般可以跑出清晰的蛋白条带。
电泳时最后采用低电压低电流电泳。
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