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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 真菌线粒体蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种真菌样本中提取线粒体蛋白。提取过程简单方便。制备的线粒体蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解线粒体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
真菌
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液准备：
根据样本数量，每500 μl冷的蛋白提取液B中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100 mg-500 mg真菌样本，用PBS洗一次。离心收集菌体沉淀。
3. 在菌体中加入2 ml提取液A后用匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。
4. 将匀浆液在500×g离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
5. 将上清液在1000×g 离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
6. 将上清液在2000×g 离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在11000×g离心20分钟，弃上清，留沉淀。
8. 在沉淀中加入100-400 μl蛋白提取液B，充分混匀，在4℃条件下振荡20-30分钟，至无明显沉淀。
9. 在4℃，14000×g条件下离心15分钟。
10. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到真菌线粒体蛋白。
11. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
根据样本数量，每500 μl冷的蛋白提取液B中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取100 mg-500 mg真菌样本，用PBS洗一次。离心收集菌体沉淀。
3. 在菌体中加入2 ml提取液A后用匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。
4. 将匀浆液在500×g离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
5. 将上清液在1000×g 离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
6. 将上清液在2000×g 离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
7. 将上清在11000×g离心20分钟，弃上清，留沉淀。
8. 在沉淀中加入100-400 μl蛋白提取液B，充分混匀，在4℃条件下振荡20-30分钟，至无明显沉淀。
9. 在4℃，14000×g条件下离心15分钟。
10. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到真菌线粒体蛋白。
11. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分线粒体样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
真菌线粒体蛋白较少，尽可能加大真菌样品的上样量。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
处理部分线粒体样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
真菌线粒体蛋白较少，尽可能加大真菌样品的上样量。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.Yuhan Xiao, et al.
Transcription factor MoMsn2 targets the putative 3‐methylglutaconyl‐CoA hydratase‐encoding gene MoAUH1 to govern infectious growth via mitochondrial fusion/fission balance in Magnaporthe oryzae
Environmental Microbiology 2020
2.Lei Chen, et al.
Cinnamaldehyde inhibits Candida albicans growth by causing apoptosis and its treatment on vulvovaginal candidiasis and oropharyngeal candidiasis
Applied Microbiology and Biotechnology 2019
Transcription factor MoMsn2 targets the putative 3‐methylglutaconyl‐CoA hydratase‐encoding gene MoAUH1 to govern infectious growth via mitochondrial fusion/fission balance in Magnaporthe oryzae
Environmental Microbiology 2020
2.Lei Chen, et al.
Cinnamaldehyde inhibits Candida albicans growth by causing apoptosis and its treatment on vulvovaginal candidiasis and oropharyngeal candidiasis
Applied Microbiology and Biotechnology 2019
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