2-8℃

1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！

一年

WB,IP等

动物组织

1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

WB,IP等

1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒

1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒

1.离心管
2.吸头
3.一次性手套

使用注意事项：
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
 最好使用Dounce匀浆器匀浆，如果没有Dounce匀浆器，用普通1ml玻璃匀浆器匀浆也可，但是线粒体蛋白回收率会下降。



1. 提取液准备：
根据样本数量，每200 μl冷的蛋白提取液C中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取50-100mg新鲜组织样本，用手术剪刀尽可能剪碎。
3. 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 加入400μl-500 μl冷的试剂 A，置冰上10分钟。
5. 用Dounce匀浆器匀浆30-40下。然后在4℃，500×g条件下离心5分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，弃沉淀。
7. 将上清在4℃，1000×g条件下离心10分钟。弃沉淀，留上清。
8. 将上清在4℃，10000×g条件下离心20分钟。弃上清，留沉淀。
9. 在沉淀中加入200 μl-400 μl冷的试剂B，轻轻混匀。
10. 在4℃，10000×g条件下离心20分钟。弃上清，留沉淀。
11. 在沉淀中加入80 μl-150 μl蛋白提取液C，充分混匀。置4℃振荡20-30分钟。
12. 在4℃，14000×g条件下离心15分钟。
13. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得线粒体蛋白。
14. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

1.蛋白浓度低？
处理部分线粒体样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
需要足够的细胞或组织样品的上样量。

2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

1.Xiao JiangXiao-hui LiaoLi-li, et al.
Overexpression of augmenter of liver regeneration (ALR) mitigates the effect of H2O2-induced endoplasmic reticulum stress in renal tubule epithelial cells
Apoptosis 2019

2. Tao Li, Youtan Liu, Wei Xu, et al.
Polydatin mediates Parkin-dependent mitophagy and protects against mitochondria-dependent apoptosis in acute respiratory distress syndrome
Laboratory Investigation 2019

3. JieOuyang, ZhenhuaZeng et al.
SIRT3 Inactivation Promotes Acute Kidney Injury Through Elevated Acetylation of SOD2 and p53
Journal of Surgical Research 2019

4. Zhenhua Zeng, Zhongqing Chen, et al.
Polydatin Protecting Kidneys against Hemorrhagic Shock-Induced Mitochondrial Dysfunction via SIRT1 Activation and p53 Deacetylation
Oxidative Medicine and Cellular Longevity 2016

5.Wei Xiong, Shiyuan Xu, et al.
Moderate hypothermia ameliorates enterocyte mitochondrial dysfunction in severe shock and reperfusion
Journal of Surgical Research 2016