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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 酵母核蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种酵母中提取核蛋白。提取过程简单方便。制备的核蛋白纯度高，保持天然活性，绝少交叉污染。 本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
酵母
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5.蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液制备：
每200μl蛋白提取液D中分别加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3. 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每100μl体积酵母沉淀物中加入200μl酵母核蛋白提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
5. 在1000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集酵母沉淀。
6. 用500μl PBS洗涤酵母一次，离心收集菌体。
7. 酵母沉淀物中加入300-500μl酵母蛋白提取液B，充分混匀。
8. 在37℃或室温条件下轻微振荡45-60分钟。
9. 在1000×g条件下离心5-10分钟，收集沉淀，弃上清。
10. 用500μl PBS洗涤沉淀。离心收集沉淀。
11. 沉淀中加入400μl酵母核提取液 C，高速涡旋15秒混匀，然后在振荡器上振荡15-30分钟。
12. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，2000×g条件下离心5分钟，弃上清，留沉淀。
13. 在沉淀中加入200μl冷的核蛋白提取液D，充分混匀。
14. 置振荡器上振荡30-40分钟。
15. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
16. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母核蛋白。
17. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
每200μl蛋白提取液D中分别加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3. 用PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每100μl体积酵母沉淀物中加入200μl酵母核蛋白提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
5. 在1000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集酵母沉淀。
6. 用500μl PBS洗涤酵母一次，离心收集菌体。
7. 酵母沉淀物中加入300-500μl酵母蛋白提取液B，充分混匀。
8. 在37℃或室温条件下轻微振荡45-60分钟。
9. 在1000×g条件下离心5-10分钟，收集沉淀，弃上清。
10. 用500μl PBS洗涤沉淀。离心收集沉淀。
11. 沉淀中加入400μl酵母核提取液 C，高速涡旋15秒混匀，然后在振荡器上振荡15-30分钟。
12. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，2000×g条件下离心5分钟，弃上清，留沉淀。
13. 在沉淀中加入200μl冷的核蛋白提取液D，充分混匀。
14. 置振荡器上振荡30-40分钟。
15. 在4℃，12000×g条件下离心10分钟。
16. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母核蛋白。
17. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分酵母样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂BC的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
酵母核蛋白丰度较低，在条件允许的情况下，加大酵母的上样量。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂D中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。
4.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
处理部分酵母样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂BC的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
酵母核蛋白丰度较低，在条件允许的情况下，加大酵母的上样量。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂D中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。
4.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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