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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 皮肤组织蛋白提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种动物皮肤组织样品中提取蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为不具有天然蛋白构象的非活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白样本含
保存温度
2-8℃ 保存
注意事项
蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
有效期
一年
检测方法
WB等
适用样本
皮肤组织
产品特点
1.提取过程简单方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4.总蛋白提取液含多种有效成分，可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可结合释出的蛋白防止沉淀。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液 蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
4.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
5.如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
6.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1. 提取液准备：
每500ul冷的蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物B和2ul蛋白酶抑制剂混合物C，混匀后置冰上备用。
2. 取100-200mg皮肤组织样本，用PBS洗干净，然后用手术剪刀尽可能剪碎，加入500ul蛋白提取液，用组织匀浆器/匀浆机匀浆至无明显肉眼可见固体。
3. 将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡30-40分钟。
4. 在4℃，10000-14000×g条件下离心15分钟。
5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到皮肤组织蛋白。
6. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
皮肤组织蛋白质含量较低，适当加大组织上样量。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
参考文献
1.Guoying Miao, Li Sun, Baoguo Liu, et al.
MMP9 and RECK expression in cutaneous lichen planus
Int J Clin Exp Pathol 2016
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