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产品概述
product description
跨膜蛋白承担各种生物功能，在疾病的发生、发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。 贝博® BBproExtra® 真菌膜蛋白提取试剂盒是一种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒。真菌膜蛋白提取试剂盒可以从各种大型真菌（蕈菌）中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。提取小型真菌（丝状真菌等）的膜蛋白请选用贝博其他试剂盒（相关产品BB-31562）。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
真菌
产品特点
1、 使用方便。
2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
提取液A在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
提取液A在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。
离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：
g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
使用方法
1. 提取液准备：
每500 μl冷的提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2. 取100-200 mg真菌样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入500 μl提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3. 在2-8℃持续振荡1-2小时。
4. 将提取液在2-8℃下10000×g离心5分钟，取上清。
5. 在上清中加入5 μl抽提液B，充分混匀。
6. 在37℃水浴10分钟。
7. 在37℃条件下 1000×g离心5分钟。
8. 此时溶液分为2层，小心移除上层，留下下层管底部大约50 μl液体。
9. 用1-2倍体积膜蛋白溶解液C溶解该溶液，即得膜蛋白样品。
10. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
每500 μl冷的提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
2. 取100-200 mg真菌样本用手术剪刀尽可能剪碎，加入500 μl提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
3. 在2-8℃持续振荡1-2小时。
4. 将提取液在2-8℃下10000×g离心5分钟，取上清。
5. 在上清中加入5 μl抽提液B，充分混匀。
6. 在37℃水浴10分钟。
7. 在37℃条件下 1000×g离心5分钟。
8. 此时溶液分为2层，小心移除上层，留下下层管底部大约50 μl液体。
9. 用1-2倍体积膜蛋白溶解液C溶解该溶液，即得膜蛋白样品。
10. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
膜蛋白丰度较低，需要尽可能真菌上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
膜蛋白丰度较低，需要尽可能真菌上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.Jian Ju, et al.
Major components in Lilac and Litsea cubeba essential oils kill Penicillium roqueforti through mitochondrial apoptosis pathway
Industrial Crops and Products 2020
Major components in Lilac and Litsea cubeba essential oils kill Penicillium roqueforti through mitochondrial apoptosis pathway
Industrial Crops and Products 2020
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